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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌通用引物27F和1492R 已有2人参与

上下游引物之间退火温度相差11度，怎么确定最适退火温度？
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1楼 2015-08-03 16:09:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

haloarchaeon

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-08-04 15:18:30
用你说的引物能得到多大的片段，我看的文献上一般用的都是1492R和27F
...

片段可以到1500bp，还是有不少文献用的是27F，1541R。审稿时，我都会建议作者用27F，1541R，这样获得的片段长。
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haloarchaeon
7楼2015-08-04 15:59:09
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feng37ye

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
取个什么名啊: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-08-04 15:16:11
以Tm值低的那个数减去5度所得的值为初始退火温度，PCR后根据结果调整，多半是提高温度直到结果满意

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-08-04 10:06:51
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、扩增细菌16SrRNA基因建议用27F和1541R,因为1541R能靶定3‘末端，可以得到比较长的16SrRNA基因，而1492R获得的产物比较短。
2、对于退火温度，我实验室常用55度。
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取个什么名啊
haloarchaeon
3楼2015-08-04 14:46:51
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
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haloarchaeon
4楼2015-08-04 14:55:06
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by haloarchaeon at 2015-08-04 14:46:51
1、扩增细菌16SrRNA基因建议用27F和1541R,因为1541R能靶定3‘末端，可以得到比较长的16SrRNA基因，而1492R获得的产物比较短。
2、对于退火温度，我实验室常用55度。

用你说的引物能得到多大的片段，我看的文献上一般用的都是1492R和27F

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5楼2015-08-04 15:18:30
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by haloarchaeon at 2015-08-04 14:55:06
关于退火温度可以用“PCR引物（寡核苷酸）计算器”计算，以两条引物中低的Tm值为退火温度，如果有smear，可以提高温度。

我算了，两者差的还是很多

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6楼2015-08-04 15:18:54
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haloarchaeon

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-08-04 15:18:54
我算了，两者差的还是很多
...

没有关系
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haloarchaeon
8楼2015-08-04 16:00:43
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
这对引物扩增出来的片段也是1500bp左右，这些引物有什么区别吗？

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9楼2015-08-04 16:01:29
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by haloarchaeon at 2015-08-04 15:59:09
片段可以到1500bp，还是有不少文献用的是27F，1541R。审稿时，我都会建议作者用27F，1541R，这样获得的片段长。...

这对引物扩增出来的片段也是1500bp左右，这些引物有什么区别吗？
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10楼2015-08-04 16:03:08
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