应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR引物设计求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1123  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

再闹不给糖

新虫 (正式写手)

[求助] RT-PCR引物设计求助 已有2人参与

我设计过两次RT-PCR引物，第一次用的是primer premier 5.0 设计的引物，用的软件自带的搜索引物功能，然后参照Tm，GC含量（选取45%-60%之间Tm值相近的作为引物）以及还有dimer  hairpin，false priming，选取自认为最优组合，然后发给公司合成回来之后，先用easy taq 酶体系跑普通pcr，凝胶检测结果条带比较暗，然后又用RT-PCR检测了一次，无数据出现，电泳检测，也没有目的条带出现

第二次设计RT-PCR是用NCBI网站来设计的，直接在上面输入CDS序列，搜索引物，然后按照上面搜过结果，选取成对的引物，Tm值在60+-3 大都很相近   ,然后引物自身的dimer（NTI检测，约2~5个），偶尔有发夹结构存在， 直接送公司合成回来后，直接用的RT-PCR检测，也无条带出现

已确定cDNA无问题，RT-PCR试剂盒为  快精（英文名字好像是QIjin还是什么的，公司当初取名快精还被笑称过猪饲料）

引物长度为20~22左右，经过NCBI与目的材料全基因组比对之后，除了目的染色体上面引物全部匹配外，还有其他染色体约7~8个，是14~16个碱基连续匹配的，我有一个疑问，就是按照这个匹配度来说，RT-PCR是不是至少会有带出现，不会出现无数据的情况吧、？

还有一个就是RT-PCR引物设计问题，小白一个，初次接触这个，真心不懂，设计了两次之后，都没效果，不知道该咋办了，真心求助！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
1楼 2015-07-19 22:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-21 23:04:48
你分析过目的片段吗？是不是GC含量太高了呀？比如80%以上
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-21 22:45:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再闹不给糖

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by JNVBNC at 2015-07-21 22:45:10
你分析过目的片段吗？是不是GC含量太高了呀？比如80%以上

GC含量还好，没那么高，初次判断可能还是引物有问题，一次性设计了六对引物，一个都没有条带，反向引物可能有点问题，等这次反向引物回来了，验证一下就知道什么情况了，谢谢你哈
赞一下 回复此楼
天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
3楼2015-07-22 14:25:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Kellyyoung

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你们都自己设计引物吗？为什么我们都是找出序列，让公司合成
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-28 15:20:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再闹不给糖

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Kellyyoung at 2015-07-28 15:20:55
你们都自己设计引物吗？为什么我们都是找出序列，让公司合成

自己设计引物，然后送公司合成
赞一下 回复此楼
天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
5楼2015-07-28 17:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 再闹不给糖 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +9 Eujd1 2026-03-31 10/500 2026-03-31 18:41 by JourneyLucky
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 271求调剂 +5 勒布朗@ 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:26 by hypershenger
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 083000环境科学与工程调剂，总分281 +4 橙子（胜意） 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-29 9/450 2026-03-30 21:02 by dophin1985
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 332求调剂 +6 @MZB382400 2026-03-28 6/300 2026-03-30 16:57 by 无际的草原
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 086000生物与医药调剂 +5 Feisty。 2026-03-28 9/450 2026-03-29 12:02 by longlotian
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭