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star97lx

新虫 (小有名气)

[交流] 关于western blot转膜,请教大神

小女子最近开始做western blot实验以求毕业,跑page显示的是有蛋白,但是转膜曝光之后一直没有条带,转膜后看得到marker,马上用丽春红染,也看不到蛋白,用考马斯亮蓝染剩下的胶,发现上面还剩下的是小分子蛋白。求助一下大神这是什么情况:为什么小分子的蛋白还留在胶上面?膜上一直检测不到蛋白?跪谢,不胜感激!!!!
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
具体问题具体分析,楼上的大神虽然说的内容很好很正确,但是你的这个明显是蛋白没有转移到膜上,蛋白还在你的胶上没有什么特异不特异的问题。转膜这一步失败了,首先转膜时,膜和胶之间不能有任何气泡,否则肯定转不上去,其次观察夹子正负极没有放反(一开始做实验我就干过这事),转移缓冲液的配置日期使用次数(一般3次以下),膜在转之前甲醇浸泡1min,你这个我估计是有气泡,所以没转上,一般都是可以成功的,祝好运了
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-07-17 11:09:22
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2015-07-16 13:42:41
WB出现非特异性条带的原因与解决方法

凌波丽

2015年7月16日

1.抗体浓度过高;降低一抗、二抗的浓度,可以分梯度进行。

2.一抗的特异性不足;使用单克隆抗体,单克隆位点的抗原表位是唯一的,多克隆位点 ...

她这实验蛋白还在胶上,就没有转到膜上,不需要考虑特异不特异,那是接下来曝光后看到结果才需要分析的问题。。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
11楼2015-07-17 11:12:08
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