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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » MTT值太大了，一定是染菌了吗？
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重楼连翘

银虫 (正式写手)

[求助] MTT值太大了，一定是染菌了吗？ 已有2人参与

最近做MTT，测出来OD值太大了，1以上接近2，甚至2点多，酶标仪，490nm下检测。自己在网上看，有说数值太大，可能是染菌了，怎么判断染没染菌呢？在显微镜下观察的时候没什么异样啊，培养液也没浑浊，细胞生长也很正常。我的接种密度是3000每孔，培养4天后检测，会是细胞长得太密了吗？还有不同浓度药物作用拉不开差距，是因为OD值太大了吗？求大神指点迷津，感激涕零。。。。。。
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人生苦短，该吃吃，该喝喝，该乐乐，开心才好！
1楼 2015-07-05 15:06:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

rego_wang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
重楼连翘: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:54
要要摸索一下你的细胞在96孔板里长4天后会达到什么样的OD值 再设定最初的铺板密度！
我也同意楼上的建议，既然要长4天铺3000确实可能多了
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5楼2015-07-06 15:41:49
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蓝洋飘雪

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 08:09:15
再给自己顶下啊

我们做MTT时，看有没有染菌就是找一张报纸放在板子线面，如果看到报纸上的字是清晰透亮的，就说明没有染菌，因为染菌后，培养液是浑浊的。你培养细胞的时间是不是有点长啊
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重楼连翘
人生如茶，不会苦一辈子，但会苦一阵子！
18楼2015-08-05 13:26:23
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普通回帖

重楼连翘

银虫 (正式写手)
别沉啊，自己给自己顶下

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人生苦短，该吃吃，该喝喝，该乐乐，开心才好！
2楼2015-07-05 19:27:57
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
再给自己顶下啊

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人生苦短，该吃吃，该喝喝，该乐乐，开心才好！
3楼2015-07-06 08:09:15
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
重楼连翘: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:47
应该是细胞数过多的原因，你接种的是什么细胞？正常情况下多久会长满，这些如果考虑进去就知道是什么原因了
，按你的培养周期个人觉得是细胞太多了，不知道你检测前有看过细胞饱和度没
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4楼2015-07-06 15:34:52
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yaoxuexuezi at 2015-07-06 15:34:52
应该是细胞数过多的原因，你接种的是什么细胞？正常情况下多久会长满，这些如果考虑进去就知道是什么原因了
，按你的培养周期个人觉得是细胞太多了，不知道你检测前有看过细胞饱和度没

接种的小鼠骨骼肌细胞，自己没什么经验，加MTT之前会在显微镜下看一下，觉得是挺满的，差不多第3天就能长得挺满的。那接种2000？还有OD值超过1数据是不是就算无效数据了？是不是OD值下去了药物的梯度作用才会表现出来？谢谢！
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人生苦短，该吃吃，该喝喝，该乐乐，开心才好！
6楼2015-07-06 15:56:17
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rego_wang at 2015-07-06 15:41:49
要要摸索一下你的细胞在96孔板里长4天后会达到什么样的OD值 再设定最初的铺板密度！
我也同意楼上的建议，既然要长4天铺3000确实可能多了

那铺2000？这都还是从10000，5000调下来的，一点经验也没有，纯手工摸索
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7楼2015-07-06 15:58:29
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 15:58:29
那铺2000？这都还是从10000，5000调下来的，一点经验也没有，纯手工摸索...

做MTT实验，细胞密度一般不会超过5000，这还是培养两天之内，你养4天所以觉得密度要降才行
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8楼2015-07-06 16:22:00
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 15:56:17
接种的小鼠骨骼肌细胞，自己没什么经验，加MTT之前会在显微镜下看一下，觉得是挺满的，差不多第3天就能长得挺满的。那接种2000？还有OD值超过1数据是不是就算无效数据了？是不是OD值下去了药物的梯度作用才会表现出 ...

你可以摸一下细胞密度，500，1000，2000，3000，看一下培养四天后的OD值是多少，至于药物梯度是否表现出来，我个人觉得如果你的OD值太高肯定是表现不出来的，比如超出了仪器检测限度，但也不能说没有别的情况，比如某些药物就是梯度不明显
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重楼连翘
9楼2015-07-06 16:25:08
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
送红花一朵
好的，我再试试，谢谢回复

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10楼2015-07-06 17:20:34
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