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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » MTT值太大了，一定是染菌了吗？
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
送红花一朵
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9楼: Originally posted by yaoxuexuezi at 2015-07-06 16:25:08
你可以摸一下细胞密度，500，1000，2000，3000，看一下培养四天后的OD值是多少，至于药物梯度是否表现出来，我个人觉得如果你的OD值太高肯定是表现不出来的，比如超出了仪器检测限度，但也不能说没有别的情况，比如 ...

好的，我再试试，谢谢回复
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11楼2015-07-06 17:21:39
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rego_wang

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 15:58:29
那铺2000？这都还是从10000，5000调下来的，一点经验也没有，纯手工摸索...

当然是纯手工摸索啦 很简单，就是铺细胞密度梯度的板子（500 1000 2000 3000），不加药，培养4天后，做mtt
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重楼连翘
12楼2015-07-07 12:07:36
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by rego_wang at 2015-07-07 12:07:36
当然是纯手工摸索啦 很简单，就是铺细胞密度梯度的板子（500 1000 2000 3000），不加药，培养4天后，做mtt...

谢谢，我再调整下试试，到时候要是有问题我再问下你哈，嘿嘿

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13楼2015-07-07 14:30:18
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lifengjin

金虫 (正式写手)
密度大了
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重楼连翘
大龙
14楼2015-07-09 14:21:34
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
送红花一朵
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14楼: Originally posted by lifengjin at 2015-07-09 14:21:34
密度大了

谢谢回复，没有金币了，送朵小花吧
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15楼2015-07-10 08:58:50
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永远的笑莲

铁虫 (初入文坛)
像这种实验，前期最难把握的就是接种量和培养时间的摸索，这些过程是要消耗一定时间和试剂耗材的，期间还有不少这样那样的外来因素的干扰，因此工作量也相当大。当然也挺能考验操作者的耐性和秉性。一旦摸索出来了一个成熟的体系那就轻松多了。如果不想那么繁琐的话，可以运用活细胞监测成像系统，现在这类的产品还蛮多的。比如活细胞工作站，高内涵，incucyte，juli stage等等。有些品牌的设备还能实现长时间的边培养边观察。
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重楼连翘
16楼2015-07-27 10:10:47
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
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引用回帖:
16楼: Originally posted by 永远的笑莲 at 2015-07-27 10:10:47
像这种实验，前期最难把握的就是接种量和培养时间的摸索，这些过程是要消耗一定时间和试剂耗材的，期间还有不少这样那样的外来因素的干扰，因此工作量也相当大。当然也挺能考验操作者的耐性和秉性。一旦摸索出来了一 ...

谢谢回复，课题上很多事也不是我能左右的，只能慢慢做着吧，你说的我都不是特别了解唉，有时间了解下(^_^)

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17楼2015-07-27 12:04:51
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蓝洋飘雪

木虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 08:09:15
再给自己顶下啊

我们做MTT时，看有没有染菌就是找一张报纸放在板子线面，如果看到报纸上的字是清晰透亮的，就说明没有染菌，因为染菌后，培养液是浑浊的。你培养细胞的时间是不是有点长啊
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重楼连翘
人生如茶，不会苦一辈子，但会苦一阵子！
18楼2015-08-05 13:26:23
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重楼连翘

银虫 (正式写手)
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18楼: Originally posted by 蓝洋飘雪 at 2015-08-05 13:26:23
我们做MTT时，看有没有染菌就是找一张报纸放在板子线面，如果看到报纸上的字是清晰透亮的，就说明没有染菌，因为染菌后，培养液是浑浊的。你培养细胞的时间是不是有点长啊...

谢谢回复，培养的时间是有点长了，后来调整了，确实是细胞铺多了，再加上新手计数也不太准

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19楼2015-08-05 13:55:48
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
MTT值太大，不一定是染菌，细胞接种浓度太大了也会造成的吧，一般每孔不要超过20个/ul，你这是对细胞生长进行检测还是瞬时转染表达后的细胞检测的啊，如果是瞬时转染的细胞，先转染在重新接种最后MTT检测
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
20楼2015-11-27 13:19:29
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