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重楼连翘

银虫 (正式写手)

[求助] MTT值太大了,一定是染菌了吗? 已有2人参与

最近做MTT,测出来OD值太大了,1以上接近2,甚至2点多,酶标仪,490nm下检测。自己在网上看,有说数值太大,可能是染菌了,怎么判断染没染菌呢?在显微镜下观察的时候没什么异样啊,培养液也没浑浊,细胞生长也很正常。我的接种密度是3000每孔,培养4天后检测,会是细胞长得太密了吗?还有不同浓度药物作用拉不开差距,是因为OD值太大了吗?求大神指点迷津,感激涕零。。。。。。
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rego_wang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
重楼连翘: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:54
要要摸索一下你的细胞在96孔板里长4天后会达到什么样的OD值 再设定最初的铺板密度!
我也同意楼上的建议,既然要长4天铺3000确实可能多了
5楼2015-07-06 15:41:49
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蓝洋飘雪

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 08:09:15
再给自己顶下啊

我们做MTT时,看有没有染菌就是找一张报纸放在板子线面,如果看到报纸上的字是清晰透亮的,就说明没有染菌,因为染菌后,培养液是浑浊的。你培养细胞的时间是不是有点长啊

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人生如茶,不会苦一辈子,但会苦一阵子!
18楼2015-08-05 13:26:23
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普通回帖

重楼连翘

银虫 (正式写手)

别沉啊,自己给自己顶下

[ 发自小木虫客户端 ]
人生苦短,该吃吃,该喝喝,该乐乐,开心才好!
2楼2015-07-05 19:27:57
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重楼连翘

银虫 (正式写手)

再给自己顶下啊

[ 发自小木虫客户端 ]
人生苦短,该吃吃,该喝喝,该乐乐,开心才好!
3楼2015-07-06 08:09:15
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
重楼连翘: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-07-06 15:52:47
应该是细胞数过多的原因,你接种的是什么细胞?正常情况下多久会长满,这些如果考虑进去就知道是什么原因了
,按你的培养周期个人觉得是细胞太多了,不知道你检测前有看过细胞饱和度没
4楼2015-07-06 15:34:52
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重楼连翘

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yaoxuexuezi at 2015-07-06 15:34:52
应该是细胞数过多的原因,你接种的是什么细胞?正常情况下多久会长满,这些如果考虑进去就知道是什么原因了
,按你的培养周期个人觉得是细胞太多了,不知道你检测前有看过细胞饱和度没

接种的小鼠骨骼肌细胞,自己没什么经验,加MTT之前会在显微镜下看一下,觉得是挺满的,差不多第3天就能长得挺满的。那接种2000?还有OD值超过1数据是不是就算无效数据了?是不是OD值下去了药物的梯度作用才会表现出来?谢谢!
人生苦短,该吃吃,该喝喝,该乐乐,开心才好!
6楼2015-07-06 15:56:17
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重楼连翘

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rego_wang at 2015-07-06 15:41:49
要要摸索一下你的细胞在96孔板里长4天后会达到什么样的OD值 再设定最初的铺板密度!
我也同意楼上的建议,既然要长4天铺3000确实可能多了

那铺2000?这都还是从10000,5000调下来的,一点经验也没有,纯手工摸索
人生苦短,该吃吃,该喝喝,该乐乐,开心才好!
7楼2015-07-06 15:58:29
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 15:58:29
那铺2000?这都还是从10000,5000调下来的,一点经验也没有,纯手工摸索...

做MTT实验,细胞密度一般不会超过5000,这还是培养两天之内,你养4天所以觉得密度要降才行
8楼2015-07-06 16:22:00
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yaoxuexuezi

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 重楼连翘 at 2015-07-06 15:56:17
接种的小鼠骨骼肌细胞,自己没什么经验,加MTT之前会在显微镜下看一下,觉得是挺满的,差不多第3天就能长得挺满的。那接种2000?还有OD值超过1数据是不是就算无效数据了?是不是OD值下去了药物的梯度作用才会表现出 ...

你可以摸一下细胞密度,500,1000,2000,3000,看一下培养四天后的OD值是多少,至于药物梯度是否表现出来,我个人觉得如果你的OD值太高肯定是表现不出来的,比如超出了仪器检测限度,但也不能说没有别的情况,比如某些药物就是梯度不明显

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9楼2015-07-06 16:25:08
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重楼连翘

银虫 (正式写手)

送红花一朵
好的,我再试试,谢谢回复

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人生苦短,该吃吃,该喝喝,该乐乐,开心才好!
10楼2015-07-06 17:20:34
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