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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 做MTT时发现加药组吸光值远超过对照组 已有5人参与

我是将原来的培养基吸出后再加入MTT的,不存在药物和MTT反应的问题,但是目前看来对照组吸光为1点多但是药物组吸光值却有2点多。会不会是因为我的药里有菌,使得培养基染菌,最后导致吸光值增大?还是别的原因?求指教。如果真的是由于我加药污染的话,那怎么保证药里没有菌哈????我的药是用DMSO溶的,我总不能拿去高温高压灭菌吧,药的量也很少经不起折腾啊。
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zjf710

金虫 (著名写手)

MTT值高于1.0就不准了,建议降低细胞密度。
三人行,必有我师焉
9楼2014-07-08 04:54:58
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yanna1225

金虫 (初入文坛)

前辈,我的实验也出现了这个问题,想问下原因。我不加药的没有变紫,加药的却吸光值特别大。
15楼2015-04-27 17:06:10
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普通回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
拉风蜗牛王: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢! 2014-06-03 13:38:01
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:49:48
可能是你的细胞密度太大了,MTT全部反应了,然后关于药物染菌,我之前遇到跟你差不多的问题,别人跟我讲药物一般是不会染菌,你可以在超净台里面用无菌PBS配药,然后再用滤头过滤了用。
2楼2014-06-03 10:34:03
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:49:58
对照组吸光为1点多说明细胞密度接得大了些。培养基染菌确实会导致吸光值增加很多。可以将药配好后过0.22um滤膜。另外,你的药是用DMSO溶的,配的贮液浓度多高?加在培养基里贮液体积又有多少?不知道这个是否会对实验有影响,你的对照也加了相应体积的DMSO么?
3楼2014-06-03 13:15:21
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-03 13:15:21
对照组吸光为1点多说明细胞密度接得大了些。培养基染菌确实会导致吸光值增加很多。可以将药配好后过0.22um滤膜。另外,你的药是用DMSO溶的,配的贮液浓度多高?加在培养基里贮液体积又有多少?不知道这个是否会对实 ...

我的药是用100%DMSO溶的,储备液浓度为40mM,培养基里加20uL,对照我也是加了100%DMSO的。
4楼2014-06-03 13:36:25
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-06-03 10:34:03
可能是你的细胞密度太大了,MTT全部反应了,然后关于药物染菌,我之前遇到跟你差不多的问题,别人跟我讲药物一般是不会染菌,你可以在超净台里面用无菌PBS配药,然后再用滤头过滤了用。

如果MTT全反应完了的话,那对照和加药组的吸光应该一样哈。我的药母液要用DMSO溶的,谢谢!我以后过滤下!!!
5楼2014-06-03 13:37:50
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youlan1027

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-08 10:50:11
可能是细胞密度过大,或者染菌,我们一般如果用dmso溶解药物的话,也是用无菌的,例如冻细胞用的在操作台内配药,用无菌管分装,如果用pbs,可以用一次性滤器过滤,到无菌的容器里面

[ 发自小木虫客户端 ]
静静等待
6楼2014-06-03 22:37:41
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by youlan1027 at 2014-06-03 22:37:41
可能是细胞密度过大,或者染菌,我们一般如果用dmso溶解药物的话,也是用无菌的,例如冻细胞用的在操作台内配药,用无菌管分装,如果用pbs,可以用一次性滤器过滤,到无菌的容器里面
...

照理说用DMSO溶的药应该是无菌的哈!
7楼2014-06-04 08:23:53
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yipan

铜虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 答非所问,恶意广告,多次违规 2014-07-08 12:30:05
本帖内容被屏蔽

8楼2014-07-07 16:11:56
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zjf710 at 2014-07-08 04:54:58
MTT值高于1.0就不准了,建议降低细胞密度。

谢谢!
10楼2014-07-08 08:04:05
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