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梦境先生

金虫 (小有名气)

[求助] MTT对照组的OD值比加药组低，怎么回事？

1.我现在在做药物浓度梯度，这些药都是经过初筛的，都有比较好的细胞毒性。但是，我的结果中总有那么几个药的值高于对照组的OD值，搞得整个数据不可信。我的对照组就是不加药，只加稀释后的DMSO，细胞悬液的孔，不是调零孔。
2.和老师了讨论下，他认为是我对照孔中DMSO稀释浓度的问题，可我每孔200ul的细胞悬液中DMSO比重是千分之一的啊，不至于对细胞产生毒性啊，把OD值搞得低了一些。
3.对照组比加药组OD值低是个别几个药，而且就低0.1~0.15.
4.最后，请问排版能解决问题吗？就是把DMSO孔加到中间点的位置，而不是边缘
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忙我所欲也，闲亦我所欲也
1楼 2013-10-22 20:26:32
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浪滴

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦境先生: 金币+5, ★有帮助 2013-10-22 22:46:29
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-10-23 09:07:09
1 请问你重复了几次？
2 大部分情况下对照组的OD值比给药组低很正常，这是为什么细胞毒活性实验重复率不高的原因
3  建议多重复几次
4 96孔板排除边缘的那一列，也就60个孔能用
5 建议你和经常做细胞毒实验的同学交流下
   我也仅仅做了一年的细胞毒实验，也经常出现你所描述的情况，没办法，只有重复，向别人情况！
   加油！
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2楼2013-10-22 21:27:16
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梦境先生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 浪滴 at 2013-10-22 21:27:16
1 请问你重复了几次？
2 大部分情况下对照组的OD值比给药组低很正常，这是为什么细胞毒活性实验重复率不高的原因
3  建议多重复几次
4 96孔板排除边缘的那一列，也就60个孔能用
5 建议你和经常做细胞毒实验的同 ...

我做了MCF 7，231，A5493种细胞各一次。因为是筛选出来的，按理来说，不会有负值，就是对照组OD比给药组低的情况。这个细胞毒实验重复率不高也有耳闻，初筛的时候，我就发现活性不好的药物各种负值
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忙我所欲也，闲亦我所欲也
3楼2013-10-22 22:50:31
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梦境先生

金虫 (小有名气)
还有木有大神回复？自己顶一个
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忙我所欲也，闲亦我所欲也
4楼2013-10-23 22:38:42
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦境先生: 金币+5, ★有帮助 2013-10-24 20:15:54
1，96孔板边缘的孔是不能用，仔细观察，每次培养后，这些孔中的培养基液面会低于中间孔，应该是液体蒸发的原因。
2，对照组孔数值低于给药组，这种现象是经常发生，原因不一定是药物的原因，比如接种细胞的不均匀，试剂加入的量不均匀，这种情况就多做几个复孔，然后多重复几次，删除异常数据，然后取平均值。
3，DMSO含量千分之一对细胞基本没毒性，我做过至少二十种细胞，这个没问题的。
细胞毒性实验就是挺折磨人的，我四年做了N块板，哈哈
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5楼2013-10-24 09:57:24
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梦境先生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by daibingling at 2013-10-24 09:57:24
1，96孔板边缘的孔是不能用，仔细观察，每次培养后，这些孔中的培养基液面会低于中间孔，应该是液体蒸发的原因。
2，对照组孔数值低于给药组，这种现象是经常发生，原因不一定是药物的原因，比如接种细胞的不均匀， ...

1.感觉接种均匀真心难，边加边摇离心管或者加几个孔就吹打一次感觉都差不多，说不清哪个方法接种细胞更均匀
2.看来我只好把对照组的孔多铺几个，取较大的值
3.挺折磨人的
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忙我所欲也，闲亦我所欲也
6楼2013-10-24 20:19:37
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