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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » MTT实验求助，细胞接种换液
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

[求助] MTT实验求助，细胞接种换液 已有1人参与

新虫，刚开始接触MTT细胞存活率测定实验，是为了验证药物可以对过氧化氢损伤细胞具有保护作用，。但是做了几次MTT，结果都发现加不加药物，细胞存活率都与过氧化氢组是差不多的。但是之前课题组的师兄们都已经证明这个药物是有效果的。不知我怎么做出来就是这样的，好糟心。对照组的OD值在0.5左右，是不是太低了，所以数据误差太大，要多少才行，另外 请指导96孔板换液要怎么做？
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1楼 2015-12-28 11:36:01
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看沉思录

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-28 11:48:59
还有两次对照组数据只有0.3，过氧化氢和加药的就更低了，按道理说加药的应该对细胞有保护作用的。

平行组感觉如何？
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QQ 2644862520承接整体课题服务，包括课题设计、实验实施、论文服务
3楼2015-12-28 13:26:38
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-28 22:48:00
那第一天铺板，一定第二天加药吗？我可以让细胞长两天，待细胞长到百分之70-80，然后再去加药，这样合理吗？我是MTT 与细胞孵育4小时再加的DMSO.
...

可以过两天再加药的，在对数生长期，注意后面检测空白组细胞别长过了

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7楼2015-12-29 00:07:24
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)
还有两次对照组数据只有0.3，过氧化氢和加药的就更低了，按道理说加药的应该对细胞有保护作用的。

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2楼2015-12-28 11:48:59
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fengyunwugui: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-29 10:29:07
空细胞对照组的OD值太低，你细胞孔里的细胞覆盖率怎么样，建议覆盖率要达到80%左右，不要太多也不要太少，还有就是MTT与细胞孵育的时间，时间越长，信号会相对高一些，建议3-4个小时
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fengyunwugui
4楼2015-12-28 22:00:54
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 看沉思录 at 2015-12-28 13:26:38
平行组感觉如何？...

平行组差距不是很大。

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5楼2015-12-28 22:43:34
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-28 22:00:54
空细胞对照组的OD值太低，你细胞孔里的细胞覆盖率怎么样，建议覆盖率要达到80%左右，不要太多也不要太少，还有就是MTT与细胞孵育的时间，时间越长，信号会相对高一些，建议3-4个小时

那第一天铺板，一定第二天加药吗？我可以让细胞长两天，待细胞长到百分之70-80，然后再去加药，这样合理吗？我是MTT 与细胞孵育4小时再加的DMSO.

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6楼2015-12-28 22:48:00
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-29 00:07:24
可以过两天再加药的，在对数生长期，注意后面检测空白组细胞别长过了
...

谢谢您的耐心解答！

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8楼2015-12-29 09:53:49
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-29 00:07:24
可以过两天再加药的，在对数生长期，注意后面检测空白组细胞别长过了
...

今天都是铺板第三天了，但是细胞量依然不是很多，细胞长的很慢，不知道什么原因，之前养过这细胞的师兄都说这个细胞应该长的挺快的。我96孔板铺了细胞16000个/孔。
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9楼2015-12-29 15:53:37
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-29 15:53:37
今天都是铺板第三天了，但是细胞量依然不是很多，细胞长的很慢，不知道什么原因，之前养过这细胞的师兄都说这个细胞应该长的挺快的。我96孔板铺了细胞16000个/孔。...

我觉得你细胞状态可能有问题，一般细胞2000个每孔，5天差不多能长满

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10楼2015-12-29 16:50:28
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