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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

[求助] MTT实验求助,细胞接种换液已有1人参与

新虫,刚开始接触MTT细胞存活率测定实验,是为了验证药物可以对过氧化氢损伤细胞具有保护作用,。但是做了几次MTT,结果都发现加不加药物,细胞存活率都与过氧化氢组是差不多的。但是之前课题组的师兄们都已经证明这个药物是有效果的。不知我怎么做出来就是这样的,好糟心。对照组的OD值在0.5左右,是不是太低了,所以数据误差太大,要多少才行,另外 请指导96孔板换液要怎么做?
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看沉思录

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-28 11:48:59
还有两次对照组数据只有0.3,过氧化氢和加药的就更低了,按道理说加药的应该对细胞有保护作用的。

平行组感觉如何?
QQ 2644862520承接整体课题服务,包括课题设计、实验实施、论文服务
3楼2015-12-28 13:26:38
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-28 22:48:00
那第一天铺板,一定第二天加药吗?我可以让细胞长两天,待细胞长到百分之70-80,然后再去加药,这样合理吗?我是MTT 与细胞孵育4小时再加的DMSO.
...

可以过两天再加药的,在对数生长期,注意后面检测空白组细胞别长过了

发自小木虫Android客户端
7楼2015-12-29 00:07:24
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

还有两次对照组数据只有0.3,过氧化氢和加药的就更低了,按道理说加药的应该对细胞有保护作用的。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-28 11:48:59
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fengyunwugui: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-29 10:29:07
空细胞对照组的OD值太低,你细胞孔里的细胞覆盖率怎么样,建议覆盖率要达到80%左右,不要太多也不要太少,还有就是MTT与细胞孵育的时间,时间越长,信号会相对高一些,建议3-4个小时

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2015-12-28 22:00:54
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 看沉思录 at 2015-12-28 13:26:38
平行组感觉如何?...

平行组差距不是很大。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-28 22:43:34
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-28 22:00:54
空细胞对照组的OD值太低,你细胞孔里的细胞覆盖率怎么样,建议覆盖率要达到80%左右,不要太多也不要太少,还有就是MTT与细胞孵育的时间,时间越长,信号会相对高一些,建议3-4个小时

那第一天铺板,一定第二天加药吗?我可以让细胞长两天,待细胞长到百分之70-80,然后再去加药,这样合理吗?我是MTT 与细胞孵育4小时再加的DMSO.

发自小木虫Android客户端
6楼2015-12-28 22:48:00
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-29 00:07:24
可以过两天再加药的,在对数生长期,注意后面检测空白组细胞别长过了
...

谢谢您的耐心解答!

发自小木虫Android客户端
8楼2015-12-29 09:53:49
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fengyunwugui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-29 00:07:24
可以过两天再加药的,在对数生长期,注意后面检测空白组细胞别长过了
...

今天都是铺板第三天了,但是细胞量依然不是很多,细胞长的很慢,不知道什么原因,之前养过这细胞的师兄都说这个细胞应该长的挺快的。我96孔板铺了细胞16000个/孔。
9楼2015-12-29 15:53:37
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fengyunwugui at 2015-12-29 15:53:37
今天都是铺板第三天了,但是细胞量依然不是很多,细胞长的很慢,不知道什么原因,之前养过这细胞的师兄都说这个细胞应该长的挺快的。我96孔板铺了细胞16000个/孔。...

我觉得你细胞状态可能有问题,一般细胞2000个每孔,5天差不多能长满

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10楼2015-12-29 16:50:28
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