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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 做MTT时发现加药组吸光值远超过对照组
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 做MTT时发现加药组吸光值远超过对照组 已有5人参与

我是将原来的培养基吸出后再加入MTT的，不存在药物和MTT反应的问题，但是目前看来对照组吸光为1点多但是药物组吸光值却有2点多。会不会是因为我的药里有菌，使得培养基染菌，最后导致吸光值增大？还是别的原因？求指教。如果真的是由于我加药污染的话，那怎么保证药里没有菌哈？？？？我的药是用DMSO溶的，我总不能拿去高温高压灭菌吧，药的量也很少经不起折腾啊。
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1楼 2014-06-03 09:59:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zjf710

金虫 (著名写手)
MTT值高于1.0就不准了，建议降低细胞密度。
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三人行，必有我师焉
9楼2014-07-08 04:54:58
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yanna1225

金虫 (初入文坛)
前辈，我的实验也出现了这个问题，想问下原因。我不加药的没有变紫，加药的却吸光值特别大。
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15楼2015-04-27 17:06:10
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普通回帖

luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
拉风蜗牛王: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2014-06-03 13:38:01
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:49:48
可能是你的细胞密度太大了，MTT全部反应了，然后关于药物染菌，我之前遇到跟你差不多的问题，别人跟我讲药物一般是不会染菌，你可以在超净台里面用无菌PBS配药，然后再用滤头过滤了用。
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2楼2014-06-03 10:34:03
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:49:58
对照组吸光为1点多说明细胞密度接得大了些。培养基染菌确实会导致吸光值增加很多。可以将药配好后过0.22um滤膜。另外，你的药是用DMSO溶的，配的贮液浓度多高？加在培养基里贮液体积又有多少？不知道这个是否会对实验有影响，你的对照也加了相应体积的DMSO么？
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3楼2014-06-03 13:15:21
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-03 13:15:21
对照组吸光为1点多说明细胞密度接得大了些。培养基染菌确实会导致吸光值增加很多。可以将药配好后过0.22um滤膜。另外，你的药是用DMSO溶的，配的贮液浓度多高？加在培养基里贮液体积又有多少？不知道这个是否会对实 ...

我的药是用100%DMSO溶的，储备液浓度为40mM,培养基里加20uL,对照我也是加了100%DMSO的。
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4楼2014-06-03 13:36:25
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-06-03 10:34:03
可能是你的细胞密度太大了，MTT全部反应了，然后关于药物染菌，我之前遇到跟你差不多的问题，别人跟我讲药物一般是不会染菌，你可以在超净台里面用无菌PBS配药，然后再用滤头过滤了用。

如果MTT全反应完了的话，那对照和加药组的吸光应该一样哈。我的药母液要用DMSO溶的，谢谢！我以后过滤下！！！
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5楼2014-06-03 13:37:50
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youlan1027

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:50:11
可能是细胞密度过大，或者染菌，我们一般如果用dmso溶解药物的话，也是用无菌的，例如冻细胞用的在操作台内配药，用无菌管分装，如果用pbs,可以用一次性滤器过滤，到无菌的容器里面

[ 发自小木虫客户端 ]
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静静等待
6楼2014-06-03 22:37:41
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by youlan1027 at 2014-06-03 22:37:41
可能是细胞密度过大，或者染菌，我们一般如果用dmso溶解药物的话，也是用无菌的，例如冻细胞用的在操作台内配药，用无菌管分装，如果用pbs,可以用一次性滤器过滤，到无菌的容器里面
...

照理说用DMSO溶的药应该是无菌的哈！
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7楼2014-06-04 08:23:53
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yipan

铜虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 答非所问，恶意广告，多次违规 2014-07-08 12:30:05
本帖内容被屏蔽
8楼2014-07-07 16:11:56
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zjf710 at 2014-07-08 04:54:58
MTT值高于1.0就不准了，建议降低细胞密度。

谢谢！
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10楼2014-07-08 08:04:05
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