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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 第一次用PI法测细胞凋亡，求大家指点...！
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Laure629

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次用PI法测细胞凋亡，求大家指点...！ 已有2人参与

偶按文献上的浓度，用咪喹莫特给角质形成细胞系给药，诱导它凋亡，再用PI法测流式。
由于咪喹莫特是乳膏，给药时用DMSO+DMEM溶解的...可是显微镜下看发现含有药的培养基里有许多黑色小颗粒，培养基像悬浊液一样，是不是药物木有溶解完全，会影响实验嘛...?
24小时后，观察到给药组大量细胞凋亡溶解，收集细胞做PI染色时，每到用PBS离心清洗细胞的步骤时，细胞都会少好多啊，最后细胞直接没有了！！是不是我收集细胞太晚了，细胞太脆弱，一碰就碎的原因....?
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1楼 2015-07-03 14:24:20
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徐州往事

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
Laure629(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-19 20:07:06
Laure629: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢啦！ 2015-08-03 14:37:14
收集细胞时，上清一定要离心收细胞，当细胞凋亡时，细胞会呈悬浮或者漂浮状态。如果你把上清弃去，那么凋亡细胞都被扔掉了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-07-17 15:17:12
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★ ★
Laure629: 金币+2, ★★★很有帮助, 感谢感谢！ 2015-08-03 14:37:40
本帖内容被屏蔽
3楼2015-07-19 11:02:19
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dumbooo

新虫 (初入文坛)
染细胞用的板子要是V型的，最好是那种不容易粘细胞的，而且要调整离心机转数，弃上清的时候不能抖，要一次甩干净；另外也有可能是你的imiquimod浓度比较高，导致细胞凋亡，或者细胞污染或状态不佳，染色时细胞的确会变少，但不至于没有；PI染色需要用滤网过滤，避免堵塞机器，不知道你有没有做，你要从头到尾回忆几遍有可能是哪里出了问题，或者是多方面的问题，最后提醒你PI有毒，记得戴口罩，我也经验不足，仅作参考
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4楼2015-07-19 21:35:58
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永远的笑莲

铁虫 (初入文坛)
试用PI染色进行新报凋亡的测定的时候，你用的这个过程提过复杂。经过的流程过多。程序太多，细胞就越是脆弱，再就是流式细胞仪对细胞的损害较大。最好运用专门的检测设备。现在这样的设备还蛮多的。
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5楼2015-07-27 11:54:53
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永远的笑莲

铁虫 (初入文坛)
或者你可以试试运用Annexin-V双染法，效果更佳。
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6楼2015-07-27 11:57:06
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