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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞凋亡流氏检测中PI工作液的配置
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木质心

金虫 (正式写手)

[求助] 细胞凋亡流氏检测中PI工作液的配置

要做细胞凋亡的流式检测，买的PI是粉末，不太清楚PI该怎样配置，在网上查了一下，有很多种方法看的更迷糊了，所以想求助一下大神，用于流式检测的PI工作液浓度是多少，怎样配置，实验的时候每个样用量是多少？，麻烦大家了，不胜感激~
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1楼 2013-04-11 08:54:55
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-11 20:38:18
amisking: 回帖置顶 2013-04-11 20:38:20
PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

实验步骤
1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
2. 3ml　PBS洗涤1次。
3. 离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。
4. 离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。
5. 400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去PBS。
6. 用1ml　PI染液染色，4℃避光30min。
7. 流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。
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3楼2013-04-11 17:15:44
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普通回帖

xhds5

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-04-11 17:10:26
一般都是用FITV-Annexin V和PI双染检测吧
我以前在天津三箭生物买过的是液体。直接是100T的包装 很简单
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2楼2013-04-11 17:09:35
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木质心

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cdl007 at 2013-04-11 17:15:44
PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

实验步骤
1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
2. 3ml　PBS洗涤1次。
3. 离心去PB ...

非常感谢，嘿嘿 ！
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4楼2013-04-12 20:16:36
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木质心

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhds5 at 2013-04-11 17:09:35
一般都是用FITV-Annexin V和PI双染检测吧
我以前在天津三箭生物买过的是液体。直接是100T的包装 很简单

恩，我们只是PI单染，有现成的，就是老师买了粉末不用的话有些浪费，嘿嘿！
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5楼2013-04-12 20:17:18
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bmelzc2005

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cdl007 at 2013-04-11 17:15:44
PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

实验步骤
1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。
2. 3ml　PBS洗涤1次。
3. 离心去PB ...

请问下，400目的筛网过滤的目的不是形成单个细胞吗？过滤后再离心，不是细胞又会聚集了吗？求大神解释，我对这个也不太懂，最近也打算做的。
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6楼2013-04-26 20:54:09
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