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[求助]
细胞凋亡流氏检测中PI工作液的配置
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| 要做细胞凋亡的流式检测，买的PI是粉末，不太清楚PI该怎样配置，在网上查了一下，有很多种方法看的更迷糊了，所以想求助一下大神，用于流式检测的PI工作液浓度是多少，怎样配置，实验的时候每个样用量是多少？，麻烦大家了，不胜感激~ |
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amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-11 20:38:18
amisking: 回帖置顶 2013-04-11 20:38:20
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PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 实验步骤 1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。 2. 3ml PBS洗涤1次。 3. 离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。 4. 离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。 5. 400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去PBS。 6. 用1ml PI染液染色，4℃避光30min。 7. 流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。 |
3楼2013-04-11 17:15:44
2楼2013-04-11 17:09:35
4楼2013-04-12 20:16:36
5楼2013-04-12 20:17:18
bmelzc2005
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- 专业: 生化分析及生物传感
求大神解释，我对这个也不太懂，最近也打算做的。 6楼2013-04-26 20:54:09