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木质心

金虫 (正式写手)

[求助] 细胞凋亡流氏检测中PI工作液的配置

要做细胞凋亡的流式检测,买的PI是粉末,不太清楚PI该怎样配置,在网上查了一下,有很多种方法看的更迷糊了,所以想求助一下大神,用于流式检测的PI工作液浓度是多少,怎样配置,实验的时候每个样用量是多少?,麻烦大家了,不胜感激~
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-11 20:38:18
amisking: 回帖置顶 2013-04-11 20:38:20
PI染液:将PI溶于PBS(pH7.4)中,终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

实验步骤
1. 收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500 ~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。
2. 3ml PBS洗涤1次。
3. 离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小时。
4. 离心弃去固定液,3mlPBS重悬5min。
5. 400目的筛网过滤1次,500—1000r/min离心5min,弃去PBS。
6. 用1ml PI染液染色,4℃避光30min。
7. 流式细胞仪检测:PI用氩离子激发荧光,激光光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。
3楼2013-04-11 17:15:44
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xhds5

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-04-11 17:10:26
一般都是用FITV-Annexin V和PI双染检测吧
我以前在天津三箭生物买过的是液体。直接是100T的包装 很简单
2楼2013-04-11 17:09:35
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木质心

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cdl007 at 2013-04-11 17:15:44
PI染液:将PI溶于PBS(pH7.4)中,终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。

实验步骤
1. 收集细胞{数目约(1~ 5)×106个/mL},500 ~ 1000 r/min离心5min,弃去培养液。
2. 3ml PBS洗涤1次。
3. 离心去PB ...

非常感谢,嘿嘿 !
4楼2013-04-12 20:16:36
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木质心

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xhds5 at 2013-04-11 17:09:35
一般都是用FITV-Annexin V和PI双染检测吧
我以前在天津三箭生物买过的是液体。直接是100T的包装 很简单

恩,我们只是PI单染,有现成的,就是老师买了粉末不用的话有些浪费,嘿嘿!
5楼2013-04-12 20:17:18
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