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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Laure629

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次用PI法测细胞凋亡,求大家指点...! 已有2人参与

偶按文献上的浓度,用咪喹莫特给角质形成细胞系给药,诱导它凋亡,再用PI法测流式。
由于咪喹莫特是乳膏,给药时用DMSO+DMEM溶解的...可是显微镜下看发现含有药的培养基里有许多黑色小颗粒,培养基像悬浊液一样,是不是药物木有溶解完全,会影响实验嘛...?
24小时后,观察到给药组大量细胞凋亡溶解,收集细胞做PI染色时,每到用PBS离心清洗细胞的步骤时,细胞都会少好多啊,最后细胞直接没有了!!是不是我收集细胞太晚了,细胞太脆弱,一碰就碎的原因....?
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永远的笑莲

铁虫 (初入文坛)

试用PI染色进行新报凋亡的测定的时候,你用的这个过程提过复杂。经过的流程过多。程序太多,细胞就越是脆弱,再就是流式细胞仪对细胞的损害较大。最好运用专门的检测设备。现在这样的设备还蛮多的。
5楼2015-07-27 11:54:53
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徐州往事

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
Laure629(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-19 20:07:06
Laure629: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢啦! 2015-08-03 14:37:14
收集细胞时,上清一定要离心收细胞,当细胞凋亡时,细胞会呈悬浮或者漂浮状态。如果你把上清弃去,那么凋亡细胞都被扔掉了。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-07-17 15:17:12
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

★ ★
Laure629: 金币+2, ★★★很有帮助, 感谢感谢! 2015-08-03 14:37:40
本帖内容被屏蔽

3楼2015-07-19 11:02:19
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dumbooo

新虫 (初入文坛)

染细胞用的板子要是V型的,最好是那种不容易粘细胞的,而且要调整离心机转数,弃上清的时候不能抖,要一次甩干净;另外也有可能是你的imiquimod浓度比较高,导致细胞凋亡,或者细胞污染或状态不佳,染色时细胞的确会变少,但不至于没有;PI染色需要用滤网过滤,避免堵塞机器,不知道你有没有做,你要从头到尾回忆几遍有可能是哪里出了问题,或者是多方面的问题,最后提醒你PI有毒,记得戴口罩,我也经验不足,仅作参考
4楼2015-07-19 21:35:58
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