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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高手帮助分析一下流式细胞仪双染测细胞凋亡的问题出在哪？
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萧柏

金虫 (小有名气)

[求助] 高手帮助分析一下流式细胞仪双染测细胞凋亡的问题出在哪？

请高手帮忙分析一下流式细胞图，我用双染测细胞凋亡，上样前仔细检查过样品量，和空白对照的量差不多，处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞，请问问题出在哪？
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1楼 2011-05-16 09:04:34
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
也想知道是怎么回事，帮顶！
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
2楼2011-05-16 18:38:48
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-16 20:20:16
请高手帮忙分析一下流式细胞图，我用双染测细胞凋亡，上样前仔细检查过样品量，和空白对照的量差不多，处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞，请问问题出在哪？

还有一个数据表没给出来吧，右边方框里的数据有events啥的

如果events数也很少的话，可能是染料淬灭了？被强光照射了？

要注意避光。
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3楼2011-05-16 19:59:38
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萧柏

金虫 (小有名气)
4楼2011-05-18 10:56:37
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

萧柏(金币+2): 2011-05-18 19:45:43
同意cdl007 童鞋的观点
如果你的细胞染色剂上样都没有问题
仪器工作也正常的话
就是EV值也正常的话
那么就得考虑荧光淬灭的问题了
但是我觉得得一个个因素排除，从样品到仪器一个个排除
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
5楼2011-05-18 16:37:41
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karl2011
6楼2011-07-25 21:29:22
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yilan77543

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
1209347楼: Originally posted by cdl007 at 2011-05-16 19:59:38
请高手帮忙分析一下流式细胞图，我用双染测细胞凋亡，上样前仔细检查过样品量，和空白对照的量差不多，处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞，请问问题出在哪？

还有一个数据表没给出来吧，右边 ...

个人的经验 染料的稳定性好像还是可以的吧 我做的时候有时候然好后 放几个小时貌似没有问题啊
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I don't really know where I'm going, but I hope I go far
7楼2012-11-08 21:15:08
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hallen6891

新虫 (小有名气)
EVENTS只是指被圈定的Gates里面的细胞数目，和染料是否淬灭关系不大吧，即使淬灭的话，收到了多少个细胞反应出来多少个的哈，但是他的双阴性区域都没得细胞的嘛。个人觉得他的结果应该和荧光无关，应该和样品的数目或者操作相关，不知道你用药物处理细胞后，细胞大小和密度有没有改变，也就是说你用圈定空白组细胞的门时，药物组在这个门里细胞数目占了多少（FSC和SSC那个图）？还有操作过程中是不是把细胞给洗掉一些（只有这一个样品是这样的吗？还是给药后都是这样）。
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生活要好好过！
8楼2012-11-29 16:15:50
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)
1.楼主的荧光通道可能选错了，细胞在坐标轴里基本上有一条45度直线斜向上的趋势，明显两个通道的光是有重叠的，有荧光干扰。
2.进行流式时，最好先圈一个门，规定门里面要收多少细胞，给药组可能细胞碎片太多，也被仪器认为是细胞给统计进去了，后面分析再圈门细胞自然就少了
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9楼2015-05-29 09:49:39
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