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萧柏

金虫 (小有名气)

[求助] 高手帮助分析一下流式细胞仪双染测细胞凋亡的问题出在哪?

请高手帮忙分析一下流式细胞图,我用双染测细胞凋亡,上样前仔细检查过样品量,和空白对照的量差不多,处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞,请问问题出在哪?
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

也想知道是怎么回事,帮顶!
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
2楼2011-05-16 18:38:48
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-16 20:20:16
请高手帮忙分析一下流式细胞图,我用双染测细胞凋亡,上样前仔细检查过样品量,和空白对照的量差不多,处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞,请问问题出在哪?

还有一个数据表没给出来吧,右边方框里的数据有events啥的

如果events数也很少的话,可能是染料淬灭了?被强光照射了?

要注意避光。

3楼2011-05-16 19:59:38
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萧柏

金虫 (小有名气)

4楼2011-05-18 10:56:37
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

【答案】应助回帖

萧柏(金币+2): 2011-05-18 19:45:43
同意cdl007 童鞋的观点
如果你的细胞染色剂上样都没有问题
仪器工作也正常的话
就是EV值也正常的话
那么就得考虑荧光淬灭的问题了
但是我觉得得一个个因素排除,从样品到仪器一个个排除
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
5楼2011-05-18 16:37:41
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6楼2011-07-25 21:29:22
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yilan77543

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
1209347楼: Originally posted by cdl007 at 2011-05-16 19:59:38
请高手帮忙分析一下流式细胞图,我用双染测细胞凋亡,上样前仔细检查过样品量,和空白对照的量差不多,处理数据时圈到的细胞也很多但是结果显示基本上没有细胞,请问问题出在哪?

还有一个数据表没给出来吧,右边 ...

个人的经验 染料的稳定性好像还是可以的吧 我做的时候有时候然好后 放几个小时貌似没有问题啊
I don't really know where I'm going, but I hope I go far
7楼2012-11-08 21:15:08
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hallen6891

新虫 (小有名气)

EVENTS只是指被圈定的Gates里面的细胞数目,和染料是否淬灭关系不大吧,即使淬灭的话,收到了多少个细胞反应出来多少个的哈,但是他的双阴性区域都没得细胞的嘛。个人觉得他的结果应该和荧光无关,应该和样品的数目或者操作相关,不知道你用药物处理细胞后,细胞大小和密度有没有改变,也就是说你用圈定空白组细胞的门时,药物组在这个门里细胞数目占了多少(FSC和SSC那个图)?还有操作过程中是不是把细胞给洗掉一些(只有这一个样品是这样的吗?还是给药后都是这样)。
生活要好好过!
8楼2012-11-29 16:15:50
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

1.楼主的荧光通道可能选错了,细胞在坐标轴里基本上有一条45度直线斜向上的趋势,明显两个通道的光是有重叠的,有荧光干扰。
2.进行流式时,最好先圈一个门,规定门里面要收多少细胞,给药组可能细胞碎片太多,也被仪器认为是细胞给统计进去了,后面分析再圈门细胞自然就少了
9楼2015-05-29 09:49:39
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