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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

[求助] 高效液相峰形问题 已有3人参与

请问大家有没有在柱子情况好的时候遇到峰形很宽(伴有前沿,拖尾倒不明显),对此,我做了下面一个工作,感觉还是没太解决。希望大家可以给我一点建议
1,改变有机相的比例,峰形是好看一点,但是我要的三个峰会一起出峰,分不开。
2,走梯度,还是把比例调大一点,可是基线不好看,峰形也是不明显的改善
3,我把流动相PH值从7.5变为8.6,几乎看不到有什么变化
4,柱温箱温度改变(只是这个结果还没出来)
拖尾我知道可以加几滴三乙胺,可是这个峰形不好伴有前沿,会有什么溶剂可以加的吗???
大家给我的试剂,我会考虑一下自己的样品再酌情加否的。
在此,先谢谢大家了
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
呀呀好傻: 金币+3 2015-06-19 09:00:23
呀呀好傻: 金币+4 2015-07-21 15:15:26
你的样品是溶在起始缓冲液里的吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-06-18 22:57:35
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 呀呀好傻 at 2015-06-18 17:02:05
不是 我是走的荧光 是荧光反应的呢 以前的流动相没有这样的情况 只是最近我想换一个流动相 最好是等度的  那样基线会好看一点 结果又出现了这个峰形的问题...

前伸峰常是可解离基团解离状态不一致,比如羧酸,氨基等有一部分解离了,一部分没有。所以最好用起始溶剂和缓冲体系来溶样。
5楼2015-06-19 14:19:06
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2楼2015-06-18 18:36:22
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by superyeast at 2015-06-18 22:57:35
你的样品是溶在起始缓冲液里的吗?

不是 我是走的荧光 是荧光反应的呢 以前的流动相没有这样的情况 只是最近我想换一个流动相 最好是等度的  那样基线会好看一点 结果又出现了这个峰形的问题
父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
4楼2015-06-19 09:02:05
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by superyeast at 2015-06-19 14:19:06
前伸峰常是可解离基团解离状态不一致,比如羧酸,氨基等有一部分解离了,一部分没有。所以最好用起始溶剂和缓冲体系来溶样。...

可是我检测的东西不是直接溶解上样的,而是经过荧光反应,走荧光的,根本用不上溶样这个步骤,大神帮我想想办法吧
父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
6楼2015-06-19 16:03:55
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lich666 at 2015-06-18 18:36:22
最高告知一下分离的什么物质。

三个物质 之间就差一个磷酸
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7楼2015-06-19 16:04:30
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shenglin01

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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呀呀好傻: 金币+5 2015-06-19 16:41:54
呀呀好傻: 金币+4 2015-07-21 15:14:17
可以尝试调节检测温度和压力,以及添加一定比例的甲酸,
8楼2015-06-19 16:37:11
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by shenglin01 at 2015-06-19 16:37:11
可以尝试调节检测温度和压力,以及添加一定比例的甲酸,

温度 我知道怎么控制 压力 是调节流速吗
甲酸啊 我看一下
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9楼2015-06-19 16:41:47
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chenwf6

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
呀呀好傻: 金币+4 2015-07-21 15:14:37
1、你分离用的柱子选对了吗?新的还是旧的,冲洗时间和平衡时间多久,最好要半小时左右。
2、其实出现分离不开,有机相应该调低点,这样的话样品之间分有足够的时间进行彻底的分离,并不是加大有机相比例
3、调节流动相比例,往往帮助不是很大,因为其主要是影响出峰时间,流动速度亦然,不过可以试试
10楼2015-06-28 22:37:05
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