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BiFC只能验证蛋白的直接互作吗 已有2人参与
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| BiFC实验结果两个蛋白有互作，但酵母双杂交不互作，求解！？ |
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3楼2015-06-10 19:08:59
starseacow
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2楼2015-06-10 15:52:37
calorimetry
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【答案】应助回帖
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BiFC阳性能够说明说明是两个蛋白直接互作！ 双分子荧光互补技术BiFC（Bimolecular Fluorescence Complementation） 是将荧光报告蛋白按照规则分成没有荧光的两段，分别与诱饵蛋白和捕获蛋白融合，只有在诱饵蛋白和捕获蛋白发生相互作用的情况下，两段不完整的荧光报告蛋白才会形成完整的报告蛋白，发出荧光。活细胞收集后，在流式细胞仪中的检测是实时进行的，只要细胞中有荧光产生就会被捕捉到信号，因此，不论是亲和力较弱的结合还是暂时性的结合都不会被遗漏。 这是一种比较新型的蛋白质相互作用检测技术，理论上讲，可能在一些时候可以比酵母双杂交更灵敏，但是无论是双分子荧光还是酵母双杂交，都涉及到一个融合蛋白的构像改变的问题，如果与荧光报道基因的两个分割部分或者转录因子的两个分割部分中两者或者另种实验方法中的报告蛋白质的两部分任何之一发生剧烈的构想变化，那么可能能够相互作用的被检测的两种蛋白质的标记者却无法形成有功能的报告蛋白质结构，那么实验结果就无法显示出阳性。而蛋白质的折叠是一种很复杂的过程，没有任何一种理论能够概括出所有已知的蛋白质的折叠过程和折叠结果，而且有些蛋白质也不是只有一种折叠路径，甚至不止一种稳定的折叠结果。 所以楼主因该多用一些蛋白质相互作用的研究方法，具体研究方法请见： Haian Fu edits ,Protein-Protein Interactions,Humana Press,2004（唯一完整版） http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7764403 此书是我在米国的师姐发的。 |
4楼2015-06-12 15:53:25
calorimetry
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5楼2015-06-12 15:54:21
