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Elsa09180519

新虫 (小有名气)

[求助] 新手做蛋白亚细胞结构定位,求教! 已有3人参与

各位大牛,童鞋:
      大家好!楼主菜鸟一枚,没有生物背景。最近要做关于蛋白亚细胞结构定位的实验,求教几个问题:
1.实验目的:同时给细胞里的两个蛋白带上荧光标签,然后观察蛋白亚细胞定位(应该是一个带GFP,一个带YFP吧)
2.问题:
(1)要实现荧光双标,仅仅观察蛋白定位,一天能完成后续实验,应该瞬转还是稳转呢?
(2)有没有靠谱的能做载体构建的公司,大家推荐一下。以及价格,如果大家知道的话。
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Elsa09180519: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢!标记两个蛋白,瞬转可以实现对吧? 2015-06-12 09:37:32
瞬转就够了
字数补丁~
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2015-06-10 01:04:30
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百客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Elsa09180519: 金币+1, 有帮助, 谢谢! 2015-06-12 09:39:48
您好,你的问题解决了吗?
3楼2015-06-10 15:48:12
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百客

新虫 (初入文坛)

引物设计,pcr扩增,载体构建,提质粒一共 1500一个。
4楼2015-06-10 16:56:03
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Elsa09180519

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 百客 at 2015-06-10 15:48:12
您好,你的问题解决了吗?

稍有点疑问,瞬转是可以,没问题。现在担心构建两个载体,转染成功率会不会很低。
5楼2015-06-12 09:39:01
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zhang6871

银虫 (正式写手)

如果做Overlay,GFP和YFP两个荧光蛋白不可以的,推荐将其中一个更换成RFP
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
6楼2015-06-12 09:55:13
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Elsa09180519

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhang6871 at 2015-06-12 09:55:13
如果做Overlay,GFP和YFP两个荧光蛋白不可以的,推荐将其中一个更换成RFP

谢谢!
7楼2015-06-12 13:13:20
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百客

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 百客 at 2015-06-10 16:56:03
引物设计,pcr扩增,载体构建,提质粒一共 1500一个。

你现在做好没?
8楼2015-06-15 10:07:38
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策马入林

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

同求瞬转protocol,谢谢啦
9楼2015-07-04 10:48:36
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