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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 新手做蛋白亚细胞结构定位，求教！
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Elsa09180519

新虫 (小有名气)

[求助] 新手做蛋白亚细胞结构定位，求教！ 已有3人参与

各位大牛，童鞋：
      大家好！楼主菜鸟一枚，没有生物背景。最近要做关于蛋白亚细胞结构定位的实验，求教几个问题：
1.实验目的：同时给细胞里的两个蛋白带上荧光标签，然后观察蛋白亚细胞定位（应该是一个带GFP，一个带YFP吧）
2.问题：
（1）要实现荧光双标，仅仅观察蛋白定位，一天能完成后续实验，应该瞬转还是稳转呢？
（2）有没有靠谱的能做载体构建的公司，大家推荐一下。以及价格，如果大家知道的话。
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1楼 2015-06-09 13:15:09
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Elsa09180519: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢！标记两个蛋白，瞬转可以实现对吧？ 2015-06-12 09:37:32
瞬转就够了
字数补丁~
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2015-06-10 01:04:30
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百客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Elsa09180519: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2015-06-12 09:39:48
您好，你的问题解决了吗？
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-10 15:48:12
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百客

新虫 (初入文坛)
引物设计，pcr扩增，载体构建，提质粒一共 1500一个。
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4楼2015-06-10 16:56:03
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Elsa09180519

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 百客 at 2015-06-10 15:48:12
您好，你的问题解决了吗？

稍有点疑问，瞬转是可以，没问题。现在担心构建两个载体，转染成功率会不会很低。
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-12 09:39:01
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zhang6871

银虫 (正式写手)
如果做Overlay，GFP和YFP两个荧光蛋白不可以的，推荐将其中一个更换成RFP
赞一下 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
6楼2015-06-12 09:55:13
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Elsa09180519

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhang6871 at 2015-06-12 09:55:13
如果做Overlay，GFP和YFP两个荧光蛋白不可以的，推荐将其中一个更换成RFP

谢谢！
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7楼2015-06-12 13:13:20
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百客

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 百客 at 2015-06-10 16:56:03
引物设计，pcr扩增，载体构建，提质粒一共 1500一个。

你现在做好没？
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8楼2015-06-15 10:07:38
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策马入林

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

同求瞬转protocol,谢谢啦
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-07-04 10:48:36
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