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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测 已有5人参与

大家好，我近期做蛋白结晶，最近得到了好多疑似的结果，有的很像结晶，我不知道后续该怎么优化检测之类的，有人说结晶种类多有可能是缓冲体系中的盐结晶了，这个怎么验证呢，一般做蛋白结晶都是怎么确定它是不是你想要的那种结果呢，求高人指点。附件只是其中的两种结果。

蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测
IMG_20140316_083749.jpg


蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测-1
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蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测-2
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蛋白结晶出现疑似晶体结构，后续该如何优化检测-3
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虫子
1楼 2014-03-18 08:17:59
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sky_x1227 at 2014-03-18 09:51:14
你好，我是初步做这个结晶，不是很懂，这个loop是专业捞晶体的设备吗，还是普通的接种环之类的就行，一般晶体电泳需要多少晶体，我现在做的是48孔坐滴板，点晶样品才点1ul，结出来的晶体够做电泳的吗？...

Loop是专门捞晶体的工具，是一个大约0.05mm-0.4mm的尼龙环。
你先在EP管口加大约20微升结晶池液，然后将晶体捞进去，随后将液滴顺到EP管底，然后4000转离心5分钟，小心的吸去上清液，注意不要碰到晶体。
接下来再加入20微升结晶池液，离心，吸去上清液。反复几次，算是洗晶体。每次清洗液都要留着作对照。
最后你觉得差不多洗干净了，就把晶体融了，然后跑胶。
如果清洗液没有条带，而晶体样有条带，说明晶体是蛋白晶。
希望对你有帮助。
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4楼2014-03-18 10:31:01
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普通回帖

lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sky_x1227: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-03-18 11:05:28
用loop将晶体捞起来，洗干净，跑个晶体电泳就知道了。
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2楼2014-03-18 09:39:03
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 09:39:03
用loop将晶体捞起来，洗干净，跑个晶体电泳就知道了。

你好，我是初步做这个结晶，不是很懂，这个loop是专业捞晶体的设备吗，还是普通的接种环之类的就行，一般晶体电泳需要多少晶体，我现在做的是48孔坐滴板，点晶样品才点1ul，结出来的晶体够做电泳的吗？
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虫子
3楼2014-03-18 09:51:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

你结晶条件里是不是有磷酸氢二铵？
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5楼2014-03-18 10:32:28
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:31:01
Loop是专门捞晶体的工具，是一个大约0.05mm-0.4mm的尼龙环。
你先在EP管口加大约20微升结晶池液，然后将晶体捞进去，随后将液滴顺到EP管底，然后4000转离心5分钟，小心的吸去上清液，注意不要碰到晶体。
接下来再 ...

晶体如何溶解呢，另外跑晶体电泳一颗晶体就够了吗，你看一下我的图片上我觉得晶体不太大啊，这样一颗跑电泳能出结果吗，求再次指导一下，你上面回复的内容很详细，很有帮助，谢谢你。
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虫子
6楼2014-03-18 11:00:53
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:32:28
你结晶条件里是不是有磷酸氢二铵？

你好，我刚看了一下试剂盒里buffer的配方，出现晶体的几组试剂中分别含有，硫酸铵，硫酸锂，氯化镁等铵盐钠盐的成分
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虫子
7楼2014-03-18 11:08:06
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

1.用枪反复吹吸晶体就溶解了。蛋白晶通常很脆弱的，轻轻一碰就散了。
2.你的晶体确实很小，所以要多捞一些。
3.铵盐很容易晶体，所以你还是跑个胶确定一下是不是蛋白晶体吧，要不然白优化了。
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8楼2014-03-18 16:54:06
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 16:54:06
1.用枪反复吹吸晶体就溶解了。蛋白晶通常很脆弱的，轻轻一碰就散了。
2.你的晶体确实很小，所以要多捞一些。
3.铵盐很容易晶体，所以你还是跑个胶确定一下是不是蛋白晶体吧，要不然白优化了。

好的  谢谢你了
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虫子
9楼2014-03-18 17:17:32
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highlyhong

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

蛋白质晶体非常脆，你可以拔几根你的眼睫毛，然后粘在一个小木棍上，用睫毛轻轻拨动，如果睫毛能破坏晶体，基本就是蛋白晶体，如果很大力都不行，晶体特别结实，则是盐晶
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最真的就是最好的
10楼2014-03-30 16:33:56
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