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蛋白质生物学实验经验

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虫子

1楼2014-03-18 08:17:59

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lihe131

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3楼: Originally posted by sky_x1227 at 2014-03-18 09:51:14
你好，我是初步做这个结晶，不是很懂，这个loop是专业捞晶体的设备吗，还是普通的接种环之类的就行，一般晶体电泳需要多少晶体，我现在做的是48孔坐滴板，点晶样品才点1ul，结出来的晶体够做电泳的吗？...

Loop是专门捞晶体的工具，是一个大约0.05mm-0.4mm的尼龙环。
你先在EP管口加大约20微升结晶池液，然后将晶体捞进去，随后将液滴顺到EP管底，然后4000转离心5分钟，小心的吸去上清液，注意不要碰到晶体。
接下来再加入20微升结晶池液，离心，吸去上清液。反复几次，算是洗晶体。每次清洗液都要留着作对照。
最后你觉得差不多洗干净了，就把晶体融了，然后跑胶。
如果清洗液没有条带，而晶体样有条带，说明晶体是蛋白晶。
希望对你有帮助。

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4楼2014-03-18 10:31:01

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lihe131

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sky_x1227: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-03-18 11:05:28

用loop将晶体捞起来，洗干净，跑个晶体电泳就知道了。

2楼2014-03-18 09:39:03

sky_x1227

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2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 09:39:03
用loop将晶体捞起来，洗干净，跑个晶体电泳就知道了。

你好，我是初步做这个结晶，不是很懂，这个loop是专业捞晶体的设备吗，还是普通的接种环之类的就行，一般晶体电泳需要多少晶体，我现在做的是48孔坐滴板，点晶样品才点1ul，结出来的晶体够做电泳的吗？

虫子

3楼2014-03-18 09:51:14

lihe131

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你结晶条件里是不是有磷酸氢二铵？

5楼2014-03-18 10:32:28

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4楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:31:01
Loop是专门捞晶体的工具，是一个大约0.05mm-0.4mm的尼龙环。
你先在EP管口加大约20微升结晶池液，然后将晶体捞进去，随后将液滴顺到EP管底，然后4000转离心5分钟，小心的吸去上清液，注意不要碰到晶体。
接下来再 ...

晶体如何溶解呢，另外跑晶体电泳一颗晶体就够了吗，你看一下我的图片上我觉得晶体不太大啊，这样一颗跑电泳能出结果吗，求再次指导一下，你上面回复的内容很详细，很有帮助，谢谢你。

虫子

6楼2014-03-18 11:00:53

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5楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 10:32:28
你结晶条件里是不是有磷酸氢二铵？

你好，我刚看了一下试剂盒里buffer的配方，出现晶体的几组试剂中分别含有，硫酸铵，硫酸锂，氯化镁等铵盐钠盐的成分

虫子

7楼2014-03-18 11:08:06

lihe131

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1.用枪反复吹吸晶体就溶解了。蛋白晶通常很脆弱的，轻轻一碰就散了。
2.你的晶体确实很小，所以要多捞一些。
3.铵盐很容易晶体，所以你还是跑个胶确定一下是不是蛋白晶体吧，要不然白优化了。

8楼2014-03-18 16:54:06

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8楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 16:54:06
1.用枪反复吹吸晶体就溶解了。蛋白晶通常很脆弱的，轻轻一碰就散了。
2.你的晶体确实很小，所以要多捞一些。
3.铵盐很容易晶体，所以你还是跑个胶确定一下是不是蛋白晶体吧，要不然白优化了。

好的谢谢你了

虫子

9楼2014-03-18 17:17:32

highlyhong

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蛋白质晶体非常脆，你可以拔几根你的眼睫毛，然后粘在一个小木棍上，用睫毛轻轻拨动，如果睫毛能破坏晶体，基本就是蛋白晶体，如果很大力都不行，晶体特别结实，则是盐晶

最真的就是最好的

10楼2014-03-30 16:33:56