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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白结晶出现疑似晶体结构,后续该如何优化检测已有5人参与

大家好,我近期做蛋白结晶,最近得到了好多疑似的结果,有的很像结晶,我不知道后续该怎么优化检测之类的,有人说结晶种类多有可能是缓冲体系中的盐结晶了,这个怎么验证呢,一般做蛋白结晶都是怎么确定它是不是你想要的那种结果呢,求高人指点。附件只是其中的两种结果。

蛋白结晶出现疑似晶体结构,后续该如何优化检测
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蛋白结晶出现疑似晶体结构,后续该如何优化检测-1
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蛋白结晶出现疑似晶体结构,后续该如何优化检测-2
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蛋白结晶出现疑似晶体结构,后续该如何优化检测-3
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虫子
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 16:54:06
1.用枪反复吹吸晶体就溶解了。蛋白晶通常很脆弱的,轻轻一碰就散了。
2.你的晶体确实很小,所以要多捞一些。
3.铵盐很容易晶体,所以你还是跑个胶确定一下是不是蛋白晶体吧,要不然白优化了。

好的  谢谢你了
虫子
9楼2014-03-18 17:17:32
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sky_x1227: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2014-03-18 11:05:28
用loop将晶体捞起来,洗干净,跑个晶体电泳就知道了。
2楼2014-03-18 09:39:03
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sky_x1227

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2014-03-18 09:39:03
用loop将晶体捞起来,洗干净,跑个晶体电泳就知道了。

你好,我是初步做这个结晶,不是很懂,这个loop是专业捞晶体的设备吗,还是普通的接种环之类的就行,一般晶体电泳需要多少晶体,我现在做的是48孔坐滴板,点晶样品才点1ul,结出来的晶体够做电泳的吗?
虫子
3楼2014-03-18 09:51:14
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sky_x1227 at 2014-03-18 09:51:14
你好,我是初步做这个结晶,不是很懂,这个loop是专业捞晶体的设备吗,还是普通的接种环之类的就行,一般晶体电泳需要多少晶体,我现在做的是48孔坐滴板,点晶样品才点1ul,结出来的晶体够做电泳的吗?...

Loop是专门捞晶体的工具,是一个大约0.05mm-0.4mm的尼龙环。
你先在EP管口加大约20微升结晶池液,然后将晶体捞进去,随后将液滴顺到EP管底,然后4000转离心5分钟,小心的吸去上清液,注意不要碰到晶体。
接下来再加入20微升结晶池液,离心,吸去上清液。反复几次,算是洗晶体。每次清洗液都要留着作对照。
最后你觉得差不多洗干净了,就把晶体融了,然后跑胶。
如果清洗液没有条带,而晶体样有条带,说明晶体是蛋白晶。
希望对你有帮助。
4楼2014-03-18 10:31:01
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