应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 凋亡DNA Ladder 检测
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2722  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tianlanchong

新虫 (初入文坛)

[求助] 凋亡DNA Ladder 检测 已有1人参与

新虫一只，第一次在小木虫提问我这周开始做DNA ladder实验，今天刚得到这样一张图，看不太懂，请各位有经验的同学帮忙分析一下结果，谢谢！我想知道我的DNA是不是降解了，能否从这张图看出凋亡的情况？
我的操作步骤是这样的：
(1) 取100~300mg冻存的动物组织，用小剪刀尽量剪碎，转入匀浆器，加入1ml裂解液，电动匀浆。室温放置5分钟。
(2) 裂解细胞：加1ml细胞裂解液，裂解液在使用前加入RNase（20mg/ml）使其终浓度为20μg/mg，之后37℃孵育37分钟；充分混匀再加蛋白酶K（20mg/ml）100μl，置65℃水浴消化2小时或过夜；
(3) 蛋白处理：加750μl 8mol/L的醋酸钾，4℃15min，再加750μl氯仿，充分混匀后，10000r/min离心10分钟后，将上清移至一新的Eppendorf管中；
(4) 沉淀DNA：加入750μl无水乙醇，上下轻柔颠倒混合，即可见乳白色沉淀，若不明显时可置-20℃过夜，12000r/min离心10分钟，去上清；
(5) 洗涤DNA：加1ml70%乙醇，混匀，10000r/min 离心5min，去上清；
(6) 溶解DNA：根据 DNA 沉淀的大小，加一定量的蒸馏水或TE，37℃溶解；
(7) 测定DNA浓度；
(8) 2%琼脂糖凝胶电泳80V 2小时；
衷心感谢给我回复的大虾们！

裂解液的配方：
10mM TRIS-HCL, 0.1M EDTA， 0.8%（m/v）SDS

凋亡DNA Ladder 检测
2015-06-03 dna ladder 1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-06-04 10:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tianlanchong: 金币+2, ★有帮助 2015-06-05 09:02:43
我从7、8、9三个lane看到了肯定是有DNA弥散式降解，但是在200kb的带不亮，好像还比较暗，相对而言，所以仅凭此图，我个人为：不能证明细胞发生了凋亡。
赞一下 回复此楼
2楼2015-06-04 11:18:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlanchong

新虫 (初入文坛)
DNA ladder 的原理：
“在细胞凋亡时，内源性Mg、Ca依赖性核酸内切酶被激活，切割细胞DNA，使其成核小体间DNA链的断裂、大分子DNA链的断裂及DNA单链的断裂。其中以核小体之间DNA断裂时最多见的一种断裂方式，断裂形成的DNA长度为核小体DNA长度的整数倍，即180～200bp的整数倍。通过提取凋亡细胞的基因组DNA在1.5~2%(一般是这个浓度^_^)琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察可见到特征性的“梯状”（ladder）DNA条带。此称DNA LADDER实验。而坏死的细胞DNA则成模糊的弥散条带。”摘自细胞世界论坛.
赞一下 回复此楼
3楼2015-06-04 22:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlanchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-04 11:18:09
我从7、8、9三个lane看到了肯定是有DNA弥散式降解，但是在200kb的带不亮，好像还比较暗，相对而言，所以仅凭此图，我个人为：不能证明细胞发生了凋亡。

谢谢您的回复，我有一个疑问挺困扰的，希望能和您讨论一下，如何区分在提取过程中DNA降解和由于细胞坏死的引起的弥散式降解，这两者有何区别？
赞一下 回复此楼
4楼2015-06-04 22:13:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlanchong

新虫 (初入文坛)
我有几个问题：
1、由于这个实验用的是冻存的动物肝胰腺组织的匀浆液，而不是培养的细胞，也不是用液氮研磨制成的样，不知是否会影响最终的结果？
2、裂解液我选的是分子指南上的用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子量DNA作用的裂解液，蛋白处理及之后的实验操作都是从网上下载的，应用于细胞DNA ladder的，不知是否可行？
3、由于实验操作导致的DNA降解和细胞坏死导致的弥散式降解在电泳图上是否有区别，如何进行区分？
请做过的各位大神帮我解答分析一下，不胜感激！
赞一下 回复此楼
5楼2015-06-04 22:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
tianlanchong: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-06-05 09:02:07
引用回帖:
4楼: Originally posted by tianlanchong at 2015-06-04 22:13:45
谢谢您的回复，我有一个疑问挺困扰的，希望能和您讨论一下，如何区分在提取过程中DNA降解和由于细胞坏死的引起的弥散式降解，这两者有何区别？...

在细胞凋亡时的200bp及其整数倍的DNA电泳带应该非常亮，但是肯定也有一些弥散的带，但是弥散的带的亮度因该不会比200bp及其整数倍的DNA电泳带更亮，至少在样品细胞的凋亡持续发生时。而坏死的情况下，DNA带肯定是弥散的，电泳如同地毯。
不过要是有条件的话，建议先用流式细胞仪把凋亡的细胞给筛选出来，在做DNA ladder。
赞一下 回复此楼
6楼2015-06-05 08:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by tianlanchong at 2015-06-04 22:38:01
我有几个问题：
1、由于这个实验用的是冻存的动物肝胰腺组织的匀浆液，而不是培养的细胞，也不是用液氮研磨制成的样，不知是否会影响最终的结果？
2、裂解液我选的是分子指南上的用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中 ...

我不知道你的具体的操作流程，如果操作流程没有错误，因该是能够用于你的样品细胞。
赞一下 回复此楼
7楼2015-06-05 08:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlanchong

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-05 08:34:35
我不知道你的具体的操作流程，如果操作流程没有错误，因该是能够用于你的样品细胞。...

实验室条件有限，很多实验都不能用流式检测，嘻嘻，我再试一下其他样品，这是第一次做的，谢谢哦！
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-05 09:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tianlanchong 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +4 kikiki7 2026-03-30 4/200 2026-03-30 06:46 by zhyzzh
[考研] 085601材料工程找调剂 +14 oatmealR 2026-03-29 15/750 2026-03-29 21:48 by plmuchong
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 材料学硕333求调剂 +11 北道巷 2026-03-24 11/550 2026-03-29 08:31 by fmesaito
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 284求调剂 +11 junqihahaha 2026-03-26 12/600 2026-03-27 04:37 by wxiongid
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭