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tianlanchong新虫 (初入文坛)
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凋亡DNA Ladder 检测 已有1人参与
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新虫一只，第一次在小木虫提问 我这周开始做DNA ladder实验，今天刚得到这样一张图，看不太懂，请各位有经验的同学帮忙分析一下结果，谢谢！我想知道我的DNA是不是降解了，能否从这张图看出凋亡的情况？我的操作步骤是这样的： (1) 取100~300mg冻存的动物组织，用小剪刀尽量剪碎，转入匀浆器，加入1ml裂解液，电动匀浆。室温放置5分钟。 (2) 裂解细胞：加1ml细胞裂解液，裂解液在使用前加入RNase（20mg/ml）使其终浓度为20μg/mg，之后37℃孵育37分钟；充分混匀再加蛋白酶K（20mg/ml）100μl，置65℃水浴消化2小时或过夜； (3) 蛋白处理：加750μl 8mol/L的醋酸钾，4℃15min，再加750μl氯仿，充分混匀后，10000r/min离心10分钟后，将上清移至一新的Eppendorf管中； (4) 沉淀DNA：加入750μl无水乙醇，上下轻柔颠倒混合，即可见乳白色沉淀，若不明显时可置-20℃过夜，12000r/min离心10分钟，去上清； (5) 洗涤DNA：加1ml70%乙醇，混匀，10000r/min 离心5min，去上清； (6) 溶解DNA：根据 DNA 沉淀的大小，加一定量的蒸馏水或TE，37℃溶解； (7) 测定DNA浓度； (8) 2%琼脂糖凝胶电泳80V 2小时； 衷心感谢给我回复的大虾们！ 裂解液的配方： 10mM TRIS-HCL, 0.1M EDTA， 0.8%（m/v）SDS  2015-06-03 dna ladder 1.jpg |
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