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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 细菌基因组提取，革兰氏阳性和阴性菌差别大么
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546516632

铜虫 (小有名气)

[求助] 细菌基因组提取，革兰氏阳性和阴性菌差别大么 已有9人参与

用的是试剂盒，完全按照要求加溶菌酶20μL溶菌酶和RNA酶后，水浴30min。提取枯草芽孢杆菌，提了4次，电泳都没有条带阴沟长杆菌一次就提出来了
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1楼 2015-06-03 15:28:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by guoqin_shiyin at 2015-06-08 19:24:03
还好啊，买个试剂盒，多提几次就出来了。有时候即使电泳没条带，也一样可以pcr

我提过枯草感觉还好的。第一次电泳无条带，第二次就很好了。溶菌酶破壁，没问题。

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2015-06-08 19:25:01
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
革兰氏阴性和阳性菌就是根据细胞壁成分不同分类的，提取DNA首先要破坏细胞壁，所以方法或步骤上肯定有差别了，当然差别也不大，就在破壁这一步，对DNA不是特别高的话用普通的阴性或阳性试剂盒提取相应的菌DNA，或者用物理方法破壁也行，比如超声波，压榨机等，要求高的话就要自己好好摸索提取方法了。
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6楼2015-06-05 00:58:05
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TNX6

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
546516632: 金币+5, ★有帮助 2015-06-09 08:57:41
这个阴性菌跟阳性菌差距还是有的，但不是很大，主要是在细胞壁厚薄上。枯草芽孢杆菌是阳性菌，用阴性菌DNA的提取方法来提取，应该不会成功（我尝试过，没成功过，自己推测是细胞裂解这一步有问题）。你可以去网上找阳性菌的提取方法，手动提一次看看。我基本都是手动提取的，感觉纯度跟浓度，与试剂盒相比较，没啥差距。
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奋斗的科研哈士奇
7楼2015-06-05 09:14:03
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

差别还是不小的，用G-的方法提G+一般提不出来。
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大家相互帮助哈
8楼2015-06-07 15:29:24
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
还好啊，买个试剂盒，多提几次就出来了。有时候即使电泳没条带，也一样可以pcr

[ 发自小木虫客户端 ]
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9楼2015-06-08 19:24:03
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匿名

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11楼2015-06-08 19:48:45
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bryantchow

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nono2009: 金币-10, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 严禁回帖广告 2015-06-08 13:45:24
本帖内容被屏蔽
2楼2015-06-03 20:18:29
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shashi126
3楼2015-06-03 21:47:01
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普鲁旺斯花季

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很大的，一直做得是筛选菌进行鉴定，其中有一个菌用革兰氏阳性提了好几次都没提出来，然后改用阴性去提，一下就做出来了。所以多余两种菌的处理方法不同，结果是不同的
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一生转而得一夏，当司掌好年华
4楼2015-06-03 23:54:23
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546516632

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 普鲁旺斯花季 at 2015-06-03 23:54:23
很大的，一直做得是筛选菌进行鉴定，其中有一个菌用革兰氏阳性提了好几次都没提出来，然后改用阴性去提，一下就做出来了。所以多余两种菌的处理方法不同，结果是不同的

什么意思？阳性菌和阴性菌试剂盒不同么
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5楼2015-06-04 09:37:01
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