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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于热启动taq酶和逆转录酶相互抑制的问题
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zhangyep121

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于热启动taq酶和逆转录酶相互抑制的问题

亲们，发挥大家想象力和智商的时候到了，我现在遇到一个PCR难题，跟大家讨论一下，希望大家集思广益，支支招，在做RNA类扩增的时候，发现逆转录酶对热启动taq酶存在抑制作用，这一点已经确认了，目前发现，只有在taq酶和逆转录酶都有活性的情况下，才会抑制，taq酶只有在跟Mg2+接触时，才有活性，也就是说，不遇到镁离子，taq酶是不会受逆转录酶影响的，而50度逆转录期间，taq酶一旦具有活性，就会被体系中的逆转录酶搞，影响扩增效果，但是50度时如果没接触到逆转酶，即使在95度时加入逆转录酶，是不会影响扩增效果的，也就是说逆转录酶失活后，不抑制taq酶，现在请问大家：如何使50度15分钟逆转录阶段，Mg离子，taq酶，逆转录酶，在一个体系中，却又不相互影响？
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1楼2015-06-03 15:22:19
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cxkhhh

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以选择先逆转录，再去做扩增，或者可以试试BIOGHC DNA Polymeras，PCR反应开始前，应将反应混合物95℃加热6分钟。只有这样，活性才能被完全释放，这保证了PCR反应的高度特异性。
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22楼2019-03-05 17:09:28
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