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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » ATP荧光实验求助！！！
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soyida

金虫 (初入文坛)

[求助] ATP荧光实验求助！！！已有2人参与

在下想用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法，观察细胞分泌ATP的荧光。
在一些文献中查到了同样的做法，但难点是查不到他们用的荧光素酶是哪里购买的。。。。
希望有知情的高手能够热心帮助，提供详细的购买方式，非常感谢！

另外补充一下，不是用化学发光仪或荧光光谱仪测量、或裂解细胞后测细胞内容物的，而是对活体细胞进行胞外检测。
若能提供购买方式，最好可以附上应用该试剂的文献。

再三顿首，不知所言。。
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1楼2015-06-03 09:50:07
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法，观察细胞分泌ATP的荧光?
你要具体观察的对象是什么？荧光显微镜可以用于活细胞观测，我也有很多文献，但是你要告诉我你具体的实验目的。
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2楼2015-06-03 10:08:48
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
不知道你的荧光分子标记的蛋白质或者其他分子有什么具体要求，一般而言，可以直接用有机荧光分子就行，另一个问题考虑细胞定位，当然是对活细胞进行荧光检测实验效果更好。
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4楼2015-06-03 16:02:19
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
你的意思是激活荧光素酶，使其发出荧光，这样不需要在进行额外的荧光标记，只需要检测荧光素酶的活性就行了。
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6楼2015-06-04 08:42:45
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
我还是没有搞清出你检测的对象是不是细胞的分泌出的ATP，而荧光素酶仅仅是起到探针手段，还是荧光素酶本身也必须是被检测的对象？我希望搞清楚此事，以便我们继续讨论。
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7楼2015-06-04 08:45:05
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
以上情况，无论哪一种，我可以同楼主具体在讨论，不过继续讨论前，我希望进一步明确论题。
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8楼2015-06-04 09:03:02
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by soyida at 2015-06-04 09:41:27
检测对象是分泌的ATP，荧光素酶仅仅是探针，大概我没说清。。...

我这样就明白了，近几天我会给你一个参考用的试验流程。
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10楼2015-06-04 11:13:44
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果楼主只是想想检测目的细胞在特定条件下是否能够分泌出ATP，那么实验设计就很简单，只要检测细胞外的ATP的变化或者有无即可，检测ATP的存在可以直接用红外傅里叶变换光谱，通过检测ATP的特征吸收峰并与标准的ATP的特征吸收峰对比即可。至于ATP的浓度变化，可以用P的原子光谱定量化测定ATP的浓度水平。
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12楼2015-06-05 10:22:56
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
我不知道我是不是理解对了？
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13楼2015-06-05 10:23:29
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我知道你说的试验方法，就是酶法测定ATP浓度的方法，一般可用三种酶，在酶法分析手册里。我扫下来周一发给你。
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15楼2015-06-06 17:05:19
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
把你的邮箱告诉我，我在单位时，不知道为何勿发错、上传附件。
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16楼2015-06-06 17:09:38
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