24小时热门版块排行榜    

查看: 1891  |  回复: 25

soyida

金虫 (初入文坛)

[求助] ATP荧光实验求助!!! 已有2人参与

在下想用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光。
在一些文献中查到了同样的做法,但难点是查不到他们用的荧光素酶是哪里购买的。。。。
希望有知情的高手能够热心帮助,提供详细的购买方式,非常感谢!

另外补充一下,不是用化学发光仪或荧光光谱仪测量、或裂解细胞后测细胞内容物的,而是对活体细胞进行胞外检测。
若能提供购买方式,最好可以附上应用该试剂的文献。

再三顿首,不知所言。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光?
你要具体观察的对象是什么?荧光显微镜可以用于活细胞观测,我也有很多文献,但是你要告诉我你具体的实验目的。
2楼2015-06-03 10:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

不知道你的荧光分子标记的蛋白质或者其他分子有什么具体要求,一般而言,可以直接用有机荧光分子就行,另一个问题考虑细胞定位,当然是对活细胞进行荧光检测实验效果更好。
4楼2015-06-03 16:02:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

soyida

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-03 10:08:48
用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光?
你要具体观察的对象是什么?荧光显微镜可以用于活细胞观测,我也有很多文献,但是你要告诉我你具体的实验目的。

加入荧光探针之后刺激细胞,可能用药理学或机械力刺激手段,这时细胞会分泌ATP
我就是想观察这个现象
3楼2015-06-03 14:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soyida

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-03 16:02:19
不知道你的荧光分子标记的蛋白质或者其他分子有什么具体要求,一般而言,可以直接用有机荧光分子就行,另一个问题考虑细胞定位,当然是对活细胞进行荧光检测实验效果更好。

我希望的效果就是:将荧光素酶加在胞外环境中,当细胞向外分泌ATP后,荧光素酶结合ATP并发荧光。
因为在文献中看到过这样的效果,所以觉得应该有成品探针出售吧。。
而有另外的文献中,是把探针锚定在细胞膜上,这样就只能标识出膜上的ATP,再向外扩散的就无法标识,另外就是使用起来比较复杂。
所以想请教下,有没有成品探针可以达到我的预期效果呢?
谢谢你的耐心回答。
5楼2015-06-03 16:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

你的意思是激活荧光素酶,使其发出荧光,这样不需要在进行额外的荧光标记,只需要检测荧光素酶的活性就行了。
6楼2015-06-04 08:42:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

我还是没有搞清出你检测的对象是不是细胞的分泌出的ATP,而荧光素酶仅仅是起到探针手段,还是荧光素酶本身也必须是被检测的对象?我希望搞清楚此事,以便我们继续讨论。
7楼2015-06-04 08:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

以上情况,无论哪一种,我可以同楼主具体在讨论,不过继续讨论前,我希望进一步明确论题。
8楼2015-06-04 09:03:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soyida

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-04 08:45:05
我还是没有搞清出你检测的对象是不是细胞的分泌出的ATP,而荧光素酶仅仅是起到探针手段,还是荧光素酶本身也必须是被检测的对象?我希望搞清楚此事,以便我们继续讨论。

检测对象是分泌的ATP,荧光素酶仅仅是探针,大概我没说清。。
9楼2015-06-04 09:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calorimetry

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by soyida at 2015-06-04 09:41:27
检测对象是分泌的ATP,荧光素酶仅仅是探针,大概我没说清。。...

我这样就明白了,近几天我会给你一个参考用的试验流程。
10楼2015-06-04 11:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 soyida 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专业求调剂 +7 hanamiko 2026-03-18 7/350 2026-03-23 20:50 by baobaoye
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 291求调剂 +5 hhhhxn.. 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:54 by ms629
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 0854 考研调剂 招生了!AI 方向 +3 pk3725069 2026-03-19 14/700 2026-03-23 14:44 by Jack_333
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +8 材料学257求调剂 2026-03-23 9/450 2026-03-23 13:01 by ztnimte
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123!
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
请填处理意见