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soyida

金虫 (初入文坛)

[求助] ATP荧光实验求助!!! 已有2人参与

在下想用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光。
在一些文献中查到了同样的做法,但难点是查不到他们用的荧光素酶是哪里购买的。。。。
希望有知情的高手能够热心帮助,提供详细的购买方式,非常感谢!

另外补充一下,不是用化学发光仪或荧光光谱仪测量、或裂解细胞后测细胞内容物的,而是对活体细胞进行胞外检测。
若能提供购买方式,最好可以附上应用该试剂的文献。

再三顿首,不知所言。。
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果楼主只是想想检测目的细胞在特定条件下是否能够分泌出ATP,那么实验设计就很简单,只要检测细胞外的ATP的变化或者有无即可,检测ATP的存在可以直接用红外傅里叶变换光谱,通过检测ATP的特征吸收峰并与标准的ATP的特征吸收峰对比即可。至于ATP的浓度变化,可以用P的原子光谱定量化测定ATP的浓度水平。
12楼2015-06-05 10:22:56
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光?
你要具体观察的对象是什么?荧光显微镜可以用于活细胞观测,我也有很多文献,但是你要告诉我你具体的实验目的。
2楼2015-06-03 10:08:48
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soyida

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-03 10:08:48
用荧光显微镜和EMCCD结合Luciferin–luciferase的方法,观察细胞分泌ATP的荧光?
你要具体观察的对象是什么?荧光显微镜可以用于活细胞观测,我也有很多文献,但是你要告诉我你具体的实验目的。

加入荧光探针之后刺激细胞,可能用药理学或机械力刺激手段,这时细胞会分泌ATP
我就是想观察这个现象
3楼2015-06-03 14:28:47
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

不知道你的荧光分子标记的蛋白质或者其他分子有什么具体要求,一般而言,可以直接用有机荧光分子就行,另一个问题考虑细胞定位,当然是对活细胞进行荧光检测实验效果更好。
4楼2015-06-03 16:02:19
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