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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥T-DNA 突变体鉴定出问题了 已有1人参与

各位, 我最近遇到突变体鉴定的问题。 我的突变体用LP+RP 野生型有很强的带, 但是我的突变体有微弱的带,但是大小跟野生型的一样。 这是怎么回事啊。 这个突变体是上一代我pcr鉴定,选出的纯和突变。 然后繁殖一代,后代有的居然有带了 微弱的。这个突变体我已经繁殖两次了,每次我都选纯和突变的,下一代鉴定总是会有几个植株有微弱的带,请问各位有碰到类似的情况的吗? 快被折腾疯了
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伊丽莎白VIII

新虫 (小有名气)

好困

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-05-23 03:56:21
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
临风7071: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2015-05-23 14:22:47
最好贴出来你的胶图。
1 如果野生型LP+RP条带很强,突变很弱,那么即使是同一大小,如果同时用BP的产物结果正常。那么突变体的LP+RP可能是非特异扩增产物,不妨试着提高退火温度看看。
2 做PCR时可能污染了,尤其是枪头,最好选带滤芯的再做一下。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2015-05-23 04:05:46
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临风7071

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-23 04:05:46
最好贴出来你的胶图。
1 如果野生型LP+RP条带很强,突变很弱,那么即使是同一大小,如果同时用BP的产物结果正常。那么突变体的LP+RP可能是非特异扩增产物,不妨试着提高退火温度看看。
2 做PCR时可能污染了,尤其 ...

对的 BP +RP 扩增的很亮。LP+RP就是很弱在突变体里。 退火已经62了。 图在学校,下周贴上来。 PCR伤不起啊
4楼2015-05-23 14:22:35
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