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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 拟南芥T-DNA 突变体鉴定出问题了
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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥T-DNA 突变体鉴定出问题了 已有1人参与

各位， 我最近遇到突变体鉴定的问题。 我的突变体用LP+RP 野生型有很强的带， 但是我的突变体有微弱的带，但是大小跟野生型的一样。 这是怎么回事啊。 这个突变体是上一代我pcr鉴定，选出的纯和突变。 然后繁殖一代，后代有的居然有带了 微弱的。这个突变体我已经繁殖两次了，每次我都选纯和突变的，下一代鉴定总是会有几个植株有微弱的带，请问各位有碰到类似的情况的吗？ 快被折腾疯了
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1楼 2015-05-23 03:45:46
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伊丽莎白VIII

新虫 (小有名气)
好困

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-05-23 03:56:21
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
临风7071: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2015-05-23 14:22:47
最好贴出来你的胶图。
1 如果野生型LP+RP条带很强，突变很弱，那么即使是同一大小，如果同时用BP的产物结果正常。那么突变体的LP+RP可能是非特异扩增产物，不妨试着提高退火温度看看。
2 做PCR时可能污染了，尤其是枪头，最好选带滤芯的再做一下。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2015-05-23 04:05:46
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临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-23 04:05:46
最好贴出来你的胶图。
1 如果野生型LP+RP条带很强，突变很弱，那么即使是同一大小，如果同时用BP的产物结果正常。那么突变体的LP+RP可能是非特异扩增产物，不妨试着提高退火温度看看。
2 做PCR时可能污染了，尤其 ...

对的 BP +RP 扩增的很亮。LP+RP就是很弱在突变体里。 退火已经62了。 图在学校，下周贴上来。 PCR伤不起啊
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4楼2015-05-23 14:22:35
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