| 查看: 4194 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lwk5716铁杆木虫 (正式写手)
|
[交流]
关于实验中可变剪切的一些问题 已有1人参与
|
||
| 各位前辈：我在帮师姐做实验的过程中，遇到了一个问题。在扩增一个基因之后（用cDNA扩增），电泳发现只有一条带，切胶回收后连接T载体，挑菌测序，发现有些片段少了一个内含子，做了几次，挑菌7,8个会有一个，有时候少的内含子还不一样。但是，扩增后跑1%或2%琼脂糖胶只能看到一条带，可变的那条带比目的大小少100多bp，但是胶上就看不到那条带，这是怎么回事啊？在可变的内含子上设计引物倒是能扩出可变的那条带，只是全长就看不到了，是不是可变的比例占得小啊？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有209人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于ansys中，弹性模量、泊松比和切边模量的输入
已经有8人回复
- 关于合金的体积模量
已经有5人回复
- 有没有做剪切波变换的同学啊 急需交流！！！！
已经有9人回复
- 关于高温下，材料弹性模量和泊松比的测量问题
已经有10人回复
- 关于锥形瓶封口的一点疑问
已经有16人回复
- 摩擦实验中的摩擦因数怎么算
已经有9人回复
- 请教关于塑料的拉伸模量和弯曲模量的问题
已经有10人回复
- 存储模量和损耗模量
已经有3人回复
- 关于流变学中平台模量
已经有10人回复
- 关于流变测试所得剪切曲线
已经有11人回复
- 微生物发酵放大实验要注意哪些问题，小瓶转大瓶或者发酵罐
已经有17人回复
- 可变剪切体RT-PCR检测的技术问题
已经有8人回复
- 如何找一个基因是否有可变剪切及可变剪切后形成的不同的mRNA~~~
已经有7人回复
- 关于流变仪的震荡模式和剪切模式
已经有4人回复
- 关于拉伸模量的问题
已经有50人回复
- 大家来讨论下触变性与剪切变稀的关系问题
已经有50人回复
- 关于铝合金板材拉伸实验中的弹性模量结果
已经有24人回复
- 基因可变剪切-可变剪切位点可否在外显子内
已经有4人回复
- 哈克流变仪测粘度
已经有19人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 求从RNA-seq得到可变剪接的软件
已经有14人回复
- 关于剪切变稀的理解
已经有6人回复
- 弹性模量和拉伸模量、弯曲模量、剪切模量的关系
已经有3人回复
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-19 22:49:19
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-05-19 22:49:19
|
有点不明白LZ的意思，你拿cDNA克隆，正常情况下就应该不带内含子的，又何来的少一个内含子一说，是多一个内含子吧。。。7 8个菌会有一个完全不带内含子的正常序列，还是7 8个菌里面会有一个不正常的带内含子的序列？ 这种可变剪切在你整个模板中肯定是少见的，所以在你整个PCR扩增过程中较少存在，以至于肉眼看不到带，具体想验证有多大的比例，用你内含子上设计的引物，从你TA克隆的平板上挑上50—100个转化子做个菌落PCR计算一下能扩增出带的转化子数即可推算出大概的比例。 |
8楼2015-05-17 22:50:36
阿Q~~
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 77 (初中生)
- 金币: 33343.6
- 红花: 107
- 帖子: 36186
- 在线: 1028.1小时
- 虫号: 3237212
- 注册: 2014-05-27
- 性别: MM
- 专业: 宇宙学
3楼2015-05-17 09:38:12
4楼2015-05-17 17:43:38
xiaochong8693
木虫之王 (文坛精英)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 74375
- 散金: 3788
- 红花: 233
- 帖子: 47083
- 在线: 2659.9小时
- 虫号: 752823
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 动物学
6楼2015-05-17 18:30:32
5