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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于实验中可变剪切的一些问题
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 关于实验中可变剪切的一些问题 已有1人参与

各位前辈：我在帮师姐做实验的过程中，遇到了一个问题。在扩增一个基因之后（用cDNA扩增），电泳发现只有一条带，切胶回收后连接T载体，挑菌测序，发现有些片段少了一个内含子，做了几次，挑菌7,8个会有一个，有时候少的内含子还不一样。但是，扩增后跑1%或2%琼脂糖胶只能看到一条带，可变的那条带比目的大小少100多bp，但是胶上就看不到那条带，这是怎么回事啊？在可变的内含子上设计引物倒是能扩出可变的那条带，只是全长就看不到了，是不是可变的比例占得小啊？
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1楼 2015-05-17 08:56:05
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
路过的看了一下，帮顶，祝福你好运！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
3楼2015-05-17 09:38:12
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781055707

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lwk5716: 金币+5, 谢谢你的回答！ 2015-05-17 21:19:26
只要全部条带都得到了，可以考虑做个重叠pcr把要的连起来。

[ 发自小木虫客户端 ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-05-17 17:43:38
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xiaochong8693

木虫之王 (文坛精英)
哈哈～飘过～留下满满的祝福
祝福楼主 一切顺利
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6楼2015-05-17 18:30:32
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-05-17 17:43:38
只要全部条带都得到了，可以考虑做个重叠pcr把要的连起来。

我疑惑的是发生可变剪切的剪接体为何在琼脂糖胶上分不出两条带来？看带的话只是很亮很粗的一条带，加长跑的时间也是一条带。
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7楼2015-05-17 21:26:46
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