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莫丶言

木虫 (小有名气)

[交流] 请问有用过建成试剂盒测植物组织酶活的没有? 已有6人参与

最近想用南京建成的试剂盒测一下植物组织中的酶活,有些疑问不知道大家可否帮忙解答:
1.我在田间采样,是不是需要把样品放在冰盒中带到实验室,然后称重,用液氮研磨,不知道这种方法可行否?
2.缓冲液不知道是该用什么样的缓冲液,以及比例。
3.另外因为采样的地方没有仪器设备,需要把处理好的样品提取液保存,不知道该放到多少温度下保存,能够保存多长时间。
4.因为没用过试剂盒,不知道测酶活时5种不同酶可否用同一份提取液,用过这家试剂盒  的可否指教一下使用注意事项。
问的比较多也挺初级,还望各位虫友不厌解答,谢谢!
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莫丶言

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 990104036 at 2015-05-06 08:39:03
你要测定酶活为什么要用液氮研磨?液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。

如果不能用液氮研磨,那您觉得应该怎么研磨呢?
5楼2015-05-07 08:06:05
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990104036

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你要测定酶活为什么要用液氮研磨?液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。
跟党走,有肉吃。
2楼2015-05-06 08:39:03
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violin0313

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 990104036 at 2015-05-06 08:39:03
你要测定酶活为什么要用液氮研磨?液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。

我现在也碰到这个问题,样品是液氮冷冻储存的。用试剂盒测出来吸光度完全没变化。求教冷冻样品如何制成匀浆液呢?
3楼2015-05-06 10:05:49
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990104036

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by violin0313 at 2015-05-06 10:05:49
我现在也碰到这个问题,样品是液氮冷冻储存的。用试剂盒测出来吸光度完全没变化。求教冷冻样品如何制成匀浆液呢?...

测酶活应该用负20度冷冻的样品才行,液氮的不能用(液氮储存的一般是用于提取RNA)。匀浆液一般是10%的,具体浓度根据试剂盒要求。就是1g样品研磨粉碎加9ml生理盐水。研磨过程中温度不能过高。
跟党走,有肉吃。
4楼2015-05-06 15:12:10
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