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jiangpeace

铁虫 (小有名气)

[求助] 糖代谢 酶活试剂盒

我做鱼类糖代谢,大致有葡糖激酶(GK)、己糖激酶(HK)、葡萄糖脱氢酶(GDH)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)及丙酮酸激酶(PK)这几种酶,文献中好像都是自己配试剂测的,不知道是不是需要买试剂盒,一般用南京建成的比较多好像。如何选择用哪几种酶?
“上述测定结果用己糖激酶(HK, EC: 2·7·1·1)和葡萄糖脱氢酶(GDH, EC: 1·1·1·47)校正后的值为GK活性。”文献中都是这句话,不明白什么意思,还有括号里是什么意思?
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jiangpeace

铁虫 (小有名气)

大家帮忙啊,如何校正呢?
文献中的“将上法中ATP去除所测值为葡萄糖脱氢酶活性”又是什么意思?
2楼2012-08-17 09:43:36
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
帮你回答一部分问题
括号中,字母是酶的缩写,EC什么的是酶学委员会(Enzyme Commission)为酶所制作的一套编号分类法。
关于方法中其他你不明白的内容,最好把文献方法全部贴出来,大家可以帮你分析
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2012-08-17 11:07:52
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jiangpeace

铁虫 (小有名气)

GK活性测定参照Tranul15,蔡春芳,蒋传葵,高学军等的方法(Tranul15MA
etal,1996;蔡春芳,2004:蒋传葵等,1982;高学军等,2004),反应体系为:......。【上述测定结果以己糖激酶(HK)和葡萄糖脱氢酶(GDH)校正后的值为葡萄糖激酶(GK)活性值】。上法中葡萄糖水平改为0.5mM时所测值为己糖激酶(HK)值; 【上法中ATP去除所测值为葡萄糖脱氢酶(GDH)活性值】。各试管中分别加入lml反应液,在25℃恒温水浴中保温3min以上,待温度稳定后分别加入40ul酶液(空白管不加酶液),.....
请问上述【 】中的是什么意思?
4楼2012-08-18 14:59:42
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nieqin138220

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
jiangpeace: 金币+2, ★有帮助 2012-08-22 10:39:33
建议你看这篇文献,可以解决你的疑问为何要用GDH校正:《A Glucokinase-Like Enzyme in the Liver of Atlantic Salmon (Salmo Salar) 》,Michael A. Tranulis
(1)体系加100mM葡萄糖和ATP时,所测的活力值为总HK(包括I,II,III,IV)和GDH的活力值,(2)体系加0.5mM葡萄糖和ATP时,所测的值为HK(包括I,II,III)的活力值——GK(HK IV)对葡萄糖Km值高,此时不反应,(3)体系加100mM葡萄糖和不加ATP时,所测为GDH的活力值。
不抛弃理想,不放弃努力
5楼2012-08-20 15:51:42
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北国流浪情人

银虫 (小有名气)

我最近在做金鱼糖代谢相关酶活的检测,但相关试剂的配制及用量都还没有查好,不知道您有没有总结相关的试验方法和相关试剂配制及用量的记录,如果有的话,可不可以传授一下经验,万分感谢
6楼2014-04-23 21:30:53
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