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莫丶言

木虫 (小有名气)

[交流] 请问有用过建成试剂盒测植物组织酶活的没有？ 已有6人参与

最近想用南京建成的试剂盒测一下植物组织中的酶活，有些疑问不知道大家可否帮忙解答：
1.我在田间采样，是不是需要把样品放在冰盒中带到实验室，然后称重，用液氮研磨，不知道这种方法可行否？
2.缓冲液不知道是该用什么样的缓冲液，以及比例。
3.另外因为采样的地方没有仪器设备，需要把处理好的样品提取液保存，不知道该放到多少温度下保存，能够保存多长时间。
4.因为没用过试剂盒，不知道测酶活时5种不同酶可否用同一份提取液，用过这家试剂盒  的可否指教一下使用注意事项。
问的比较多也挺初级，还望各位虫友不厌解答，谢谢！
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1楼 2015-05-04 11:20:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

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液氮处理对酶生理活性没有影响，只是一方面低温条件下酶活力降低，另一方面，液氮研磨过程中应小心避免植物材料反复冻融，这会影响酶活性
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6楼2015-05-07 08:25:05
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990104036

木虫 (正式写手)
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你要测定酶活为什么要用液氮研磨？液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。
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跟党走，有肉吃。
2楼2015-05-06 08:39:03
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violin0313

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 990104036 at 2015-05-06 08:39:03
你要测定酶活为什么要用液氮研磨？液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。

我现在也碰到这个问题，样品是液氮冷冻储存的。用试剂盒测出来吸光度完全没变化。求教冷冻样品如何制成匀浆液呢？
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3楼2015-05-06 10:05:49
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990104036

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by violin0313 at 2015-05-06 10:05:49
我现在也碰到这个问题，样品是液氮冷冻储存的。用试剂盒测出来吸光度完全没变化。求教冷冻样品如何制成匀浆液呢？...

测酶活应该用负20度冷冻的样品才行，液氮的不能用（液氮储存的一般是用于提取RNA）。匀浆液一般是10%的，具体浓度根据试剂盒要求。就是1g样品研磨粉碎加9ml生理盐水。研磨过程中温度不能过高。
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4楼2015-05-06 15:12:10
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莫丶言

木虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 990104036 at 2015-05-06 08:39:03
你要测定酶活为什么要用液氮研磨？液氮那么低的温度都把蛋白质的结构活性弄没了。测酶活一般都是制成匀浆液。

如果不能用液氮研磨，那您觉得应该怎么研磨呢？
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5楼2015-05-07 08:06:05
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莫丶言

木虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-07 08:25:05
液氮处理对酶生理活性没有影响，只是一方面低温条件下酶活力降低，另一方面，液氮研磨过程中应小心避免植物材料反复冻融，这会影响酶活性

请您能说的更明白点吗？您说液氮处理对酶活没有影响，然后又说低温条件下酶活力降低，这有点矛盾啊，不甚理解，还望指明，谢谢。另外如果我是在外地用液氮研磨获得的酶提取液一次性用试剂盒测5种酶活，可否，是不是最好是获得提取液之后当天测酶活，谢谢。
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7楼2015-05-07 13:55:24
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starseacow

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7楼: Originally posted by 莫丶言 at 2015-05-07 13:55:24
请您能说的更明白点吗？您说液氮处理对酶活没有影响，然后又说低温条件下酶活力降低，这有点矛盾啊，不甚理解，还望指明，谢谢。另外如果我是在外地用液氮研磨获得的酶提取液一次性用试剂盒测5种酶活，可否，是不是 ...

你可以去读一读和酶活性有关的教科书，在低温条件下，酶催化能力降低，但单纯低温不影响蛋白生理结构，所以温度回升以后酶活性恢复，而高温则会破坏酶生理结构。从我自己的经验，我试过液氮研磨和鲜样冰浴研磨，前者我只试过抗氧化酶如CAT，影响不大，但结果精密度不如鲜样研磨。 前面的虫友不推荐液氮，我认为也有一定道理，但理由是液氮研磨如果处理不妥，在过程中有反复冻融，反而会影响蛋白结构导致测不出结果。如果你坚持用液氮，应尽可能保证材料在研磨过程中浸泡在液态中。
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8楼2015-05-07 14:11:22
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莫丶言

木虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-07 14:11:22
你可以去读一读和酶活性有关的教科书，在低温条件下，酶催化能力降低，但单纯低温不影响蛋白生理结构，所以温度回升以后酶活性恢复，而高温则会破坏酶生理结构。从我自己的经验，我试过液氮研磨和鲜样冰浴研磨，前 ...

我的研磨方法是这样的：样品带回实验室称重0.5g，然后放到研钵中，加入液氮研磨至碎，然后加入5mL的缓冲液，再继续研磨好。然后放到4度保存，我打算保存之后立刻测定。您看我的这种处理可以吗？哪里不足还需要改进，希望得到您的解答。
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9楼2015-05-08 08:51:45
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starseacow

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9楼: Originally posted by 莫丶言 at 2015-05-08 08:51:45
我的研磨方法是这样的：样品带回实验室称重0.5g，然后放到研钵中，加入液氮研磨至碎，然后加入5mL的缓冲液，再继续研磨好。然后放到4度保存，我打算保存之后立刻测定。您看我的这种处理可以吗？哪里不足还需要改进 ...

我觉得问题不大，但建议你还是先做预实验，看看这个流程能不能测出酶活来
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10楼2015-05-08 11:13:58
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