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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相色谱求助
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孔雀王

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱求助 已有2人参与

作液相色谱分析，流速1ml/min，流动相甲醇，样品用无水甲醇（AR）溶解的，进样浓度为20mg/ml，进样体积为20ul，DAD检测器，吸收波长为263nm，谱带宽度为4nm，不设参比波长，温度30℃，色谱图如下。Agilent 1100液相色谱仪，手动进样。
求教：（1）大峰的拖尾因子为1.26，是否恰当，需不需要改进？
           （2）图中几个色谱峰距离较近，是否恰当，需不需要改进？
           （3）样品是否要改用流动相甲醇（色谱级）来溶解？
           （4）进样浓度是否恰当？
小弟初涉液相色谱，烦请各位指教。谢谢！！！！

高效液相色谱求助
色谱图.jpg


高效液相色谱求助-1
色谱放大图.jpg
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1楼 2015-04-30 15:00:29
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xuanchenzi2004

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孔雀王: 金币+4, ★有帮助 2015-05-10 23:26:29
作液相色谱分析，流速1ml/min，流动相甲醇，样品用无水甲醇（AR）溶解的，进样浓度为20mg/ml，进样体积为20ul，DAD检测器，吸收波长为263nm，谱带宽度为4nm，不设参比波长，温度30℃，色谱图如下。Agilent 1100液相色谱仪，手动进样。
求教：（1）大峰的拖尾因子为1.26，是否恰当，需不需要改进？
建议改进，按照EP要求为0.8-1.5，你这个有优化空间：in a related substances test or assay, for a peak in the
chromatogram obtained with a reference solution used for
quantification, the symmetry factor is 0.8 to 1.5, unless
otherwise prescribed;
           （2）图中几个色谱峰距离较近，是否恰当，需不需要改进？
建议改进。
           （3）样品是否要改用流动相甲醇（色谱级）来溶解？
不需要，用分析级别即可。如果可以水溶，优先考虑加入适量水，防止溶剂效应。
           （4）进样浓度是否恰当？
进样量可以降低，10ul试试。
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2楼2015-04-30 16:45:15
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孔雀王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuanchenzi2004 at 2015-04-30 16:45:15
作液相色谱分析，流速1ml/min，流动相甲醇，样品用无水甲醇（AR）溶解的，进样浓度为20mg/ml，进样体积为20ul，DAD检测器，吸收波长为263nm，谱带宽度为4nm，不设参比波长，温度30℃，色谱图如下。Agilent 1100液相 ...

（1）该如何处理拖尾峰呢？
（2）色谱峰距离较近，该如何改进啊？
（4）手动进样，定量环为20ul，人为控制进样量10ul，是不是不太好啊？
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3楼2015-04-30 17:41:46
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ufoking

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
archbishop: 金币+3, 感谢参与。 2015-05-01 11:21:40
孔雀王: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-05-10 23:26:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by 孔雀王 at 2015-04-30 17:41:46
（1）该如何处理拖尾峰呢？
（2）色谱峰距离较近，该如何改进啊？
（4）手动进样，定量环为20ul，人为控制进样量10ul，是不是不太好啊？...

（1）造成峰拖尾的原因很多，罗列一下我所知道的：
1进样体积太大或者浓度太高：最常见的造成拖尾的原因，解决办法就是稀释样品或者减少进样量；
2分析物和色谱柱间的次级作用：在反相体系中，若分析酸性化合物时应在柱子pH耐受范围内降低流动相的pH使酸质子化，比如添加0.1%的TFA；若分析碱性化合物时可添加TEA作为减尾剂，同时提高pH，也可考虑提高缓冲盐浓度抑制离子化；
3如果刚开始摸好的条件没问题，一段时间后出现拖尾的现象则可能是色谱柱污染或者保护柱失效：解决办法是用比流动相更强极性的溶剂冲洗色谱柱，并且更换保护柱；如果还是不行说明色谱柱柱效已经严重下降，亦或是键合相流失甚至引发色谱柱塌陷；这种情况峰多的时候能够明显观察到，每个峰都有严重的拖尾；
4如果刚开始摸条件，并且色谱柱是新的，出现拖尾可能是管线连接不好造成柱外死体积过大；
5还有一种情况比较会让人忽视，就是假拖尾，真正的原因是两个峰靠得太近没分开；
（2）色谱峰靠得近，可能是浓度太高或者进样量过大导致，建议稀释样品，减少进样体积；如果不行就需要优化流动相及梯度洗脱程序，必要的话需添加缓冲盐。实在不行的话试试添加离子对试剂，但此法不到万不得已不要用；
（4）改不了进样量就稀释样品，但要保证稀释后的样品与流动相要很好的互溶，否则容易出现基线漂移和鬼峰的出现。
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4楼2015-05-01 01:23:52
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tuzilanlan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ufoking at 2015-05-01 01:23:52
（1）造成峰拖尾的原因很多，罗列一下我所知道的：
1进样体积太大或者浓度太高：最常见的造成拖尾的原因，解决办法就是稀释样品或者减少进样量；
2分析物和色谱柱间的次级作用：在反相体系中，若分析酸性化合物时 ...

加的三乙胺要求色谱级别骂，还是普通化学纯就可以啊
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5楼2015-09-10 20:56:27
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tuzilanlan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ufoking at 2015-05-01 01:23:52
（1）造成峰拖尾的原因很多，罗列一下我所知道的：
1进样体积太大或者浓度太高：最常见的造成拖尾的原因，解决办法就是稀释样品或者减少进样量；
2分析物和色谱柱间的次级作用：在反相体系中，若分析酸性化合物时 ...

加的三乙胺要求色谱级别骂，还是普通化学纯就可以啊
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6楼2015-09-10 20:56:57
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