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企鹅帽和茶杯

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于蛋白银染的问题已有2人参与

我跑蛋白组分SDS电泳,可能是组分含量太少,第一次用考染基本没啥条带,考虑用银染,固定液是10%的乙酸和50%的乙醇,固定了一夜,结果缩胶很厉害,是固定液浓度过高的原因吗?那过夜固定的配比是什么?还有,缩胶用蒸馏水泡着的话能不能还原了??谢谢!
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dxd1219

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议你还是百度一下银染的protocol吧 银染是很灵敏的 对于时间的掌握更是非常之重要 没听说过做银染固定一夜的 一般是固定半小时 这里给你一个我的参考步骤
Solutions for Silver Stain
1.        固定剂:双蒸水:乙醇:乙酸 250:200:50 固定30min
2.        敏化液:无水乙酸钠5.1g
           硫代硫酸钠0.15g
           去离子水52.5ml
           无水乙醇22.5ml                敏化35min后水洗三遍每次5min
3.        银染液:0.1875g硝酸银
           去离子水75ml                  银染20min后水洗两遍每次3min
4.        显色液:1.875g无水碳酸钠
           去离子水75ml
           临用前加入30ul甲醛           显色至条带清晰后立即终止
5.终止液:1gEDTA溶于75ml去离子水       终止液孵育10min后将终止液换成水即可保存一周左右的时间
在哪儿跌倒就在哪儿歇会儿……
2楼2015-04-24 10:33:48
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gao809

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
胶缩了不要紧的,因为里面有乙酸,所以会缩的,就是起固定作用的。你继续往下做就是了,等到你做完银染,胶也就涨回来了,恢复到原来的状态了。
3楼2015-04-24 21:34:55
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