| 查看: 1451 | 回复: 3 | ||
[求助]
提蛋白遇到瓶颈了，实验没法继续，各位大侠帮帮忙，一起找一下原因，有考染和银染图 已有1人参与
|
|
最近提蛋白，考染后目的条带范围内（20KD-50KD）一直没有条带，怀疑有降解，但PMSF才买不久，用的时候也很注意，但就是结果不得。我提蛋白的基本步骤是： 1、吸去培养液，然后静置一会儿使残余培养液流到瓶底后再用移液器将其吸走。 2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS，平放轻轻摇动洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液，将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。 3、按1ml裂解液（RIPA强，碧云天）加10 μl PMSF（100mM）的比例，配好裂解液摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。） 4、每瓶细胞加400μl 含PMSF的裂解液，先于冰上裂解10min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。 5、用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后冰上继续裂解20min,然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。（整个操作尽量在冰上进行） 6、超声三次，每次持续10S。（注意控制功率在20%--30%之间） 7、于4℃下12000rpm离心10min。（提前开离心机预冷）。 8、将离心后的上清分装转移到1.5ml的离心管中放于－80℃保存 求助各位大侠帮忙分析分析，找找原因。 |
回复此楼» 猜你喜欢
伙伴们，祝我生日快乐吧
已经有26人回复
-
机械专硕325，寻找调剂院校
已经有4人回复
-
333求调剂
已经有7人回复
-
考研化学学硕调剂，一志愿985
已经有4人回复
-
0854控制工程 359求调剂 可跨专业
已经有9人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有9人回复
-
化学调剂0703
已经有8人回复
-
环境工程调剂
已经有6人回复
-
326求调剂
已经有7人回复
-
一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 哪位大侠做过太子参多糖水提的，帮帮忙吧，我都快做晕了，谢谢谢谢
已经有10人回复
- DGGE 垂直电泳 灌胶技术 各位大侠帮帮忙
已经有13人回复
- 急需，请各位大侠帮帮忙找个图
已经有10人回复
- 各位大侠，帮帮忙
已经有19人回复
- 各位大侠帮帮忙，关于用线粒体DNA探讨群体起源的sci投稿杂志有哪些，很急啊！
已经有8人回复
- 求助！求助！ 齐墩果酸和熊果酸分不开!各位大侠帮帮忙啊！
已经有8人回复
- 体心四方用XRD测织构，需要选取哪些方向的的极图，急急啊，各位大侠帮帮忙
已经有4人回复
- 苯甲腈怎么除水呢？急求，各位大侠帮帮忙
已经有3人回复
- 急求！羧酸合成酰胺的简单方法，各位大侠帮忙
已经有17人回复
- 各位大侠，帮忙看一下这个氧化铝的吸附解吸曲线滞后环是什么型的啊，孔型咋样啊~~谢谢
已经有12人回复
- 想获得较大量的pBR322，却怎么也提不出来，各位大侠帮帮忙……
已经有11人回复
- 怎么用matlab画极坐标三维图？各位大侠帮帮忙啊！
已经有5人回复
- 面试：需试讲食品安全方面的课件8分钟，请各位大侠帮帮忙有没有这方面的资源，谢谢了
已经有16人回复
- 半路出家，遇到这个交流阻抗谱不知道怎么分析，还请各位大侠帮忙看看。
已经有13人回复
- 咪唑洗下来的蛋白，如何更换成另一种缓冲液，请大侠帮忙
已经有8人回复
- 那位大侠帮帮忙，总结一下最近这两辆发生的食品安全事件啊？
已经有15人回复
- 这算不算学术论文一稿多投（各位大侠帮帮忙分析一下，金币很少，帮帮忙啊）
已经有8人回复
- 【求助/交流】vector 安装不了怎么回事啊？各位大侠帮帮忙啊
已经有3人回复
- 【求助】请问怎么化简？想把这个化成一个相对简单的函数形式，求各位大侠帮忙！谢谢！
已经有6人回复
- 【求助】请教各位大侠，有没有专用的经纬度转换工具（度分秒——〉十进制）
已经有13人回复
2楼2014-04-21 23:58:01
daibingling
铁虫 (正式写手)
- 应助: 120 (高中生)
- 金币: 927.7
- 散金: 200
- 红花: 5
- 帖子: 406
- 在线: 110.6小时
- 虫号: 2116850
- 注册: 2012-11-09
- 专业: 药物分析
3楼2014-04-22 15:57:38
4楼2014-05-08 23:47:42
20