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枯草芽孢杆菌生长曲线的测定？细节问题
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枯草芽孢杆菌生长曲线的测定，菌量测定用什么方法比较好？有的人是在显微镜上用血求计数板数，有的用稀释涂板，有的用分光光度计测OD值，有的直接绘制OD值曲线，有的换算成菌量绘制。哪个准确些？ 如果用紫外分光光度计测的话，在哪那个波长测OD值，如何确定？OD值与菌量关系如何测定？后面菌量大的时候如何稀释？用什么稀释？稀释多少倍合适？ 实验过程中，取样的时间用不用刨除？用不用在紫外下灭菌再取样？取样一般去多少合适？前面取样后，发酵液逐渐减少，对后面的发酵有没有影响？用不用做重复？重复的话是都测还是在某一时间只测其中一个？ 作为种子液的话，接种是在什么时候比较好？对数期中间还是... |
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我觉得不论用哪种方法都是测定一个菌量的范围，比如说10八次方。至于哪种方法比较好我也不敢太确定。 我一直在用分光光度法来确定菌体的生长曲线，不需要紫外，用可见光OD600波长就行。一般菌体生长到对数中后期便可以达到10八次方数量级。可以每隔2小时取样测定吸光度，连续取样12到24小时，有的菌体生长很缓慢，需要测定的时间会长一些，甚至会达到24小时以上。。。 至于取样的时间，个人觉得不需要刨除，每次取样速度要快，最好在超净台中操作，取完后可以先将菌液放入摇床再去测量。 每次取样后发酵液肯定会减少，甚至到最后发酵液都被用掉，理论上讲肯定会对结果有影响，但是个人觉得影响不会很大，应该不会影响到生长曲线的绘制，毕竟只是大致确定一个生长时期，不需要确定具体的菌量。 种子液接种时期要看你试验目的，我一般是在对数生长末期进行接种。只要在对数期应该就好。 |
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