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寒露携阳

金虫 (小有名气)

[求助] 高效液相同一出峰时间样品与标准品光谱图不同,怎么回事呢? 已有1人参与

用高效液相测量样品鬼臼毒素和4’-去甲基鬼臼毒素的含量,结果在4‘-去甲基鬼臼毒素出峰时间处,样品的光谱图与标准品不同,前半截基本相同,但在380nm处比标准品多了一个吸收峰。备注:标准品是用1/5乙腈配置,样品采用甲醇超声提取,都是采用高效液相进行梯度洗脱,流动相为甲醇。相同出峰时间光谱图却不同,是怎么回事呢?是因为标准品与样品的溶剂相不同造成的吗?另外,这两个标准品的光谱图非常类似,这正常吗?是因为两种物质仅是相差一个甲基的原因吗?对这个实在是不懂,请教大神们帮忙分析下~
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old_yang

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+2, 感谢参与。 2015-04-03 11:37:23
寒露携阳: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-04-04 22:24:22
你的这两种药物不是同一个物质,紫外吸收不可能完全重合,如果完全重合了,也很难说明它们就是一种物质,紫外毕竟只是一种分析手段而已。比较保留时间的差异,你的这两个物质在你的实验条件下是同时出峰了,但如果你换不同的色谱柱,或者改变洗脱条件,它们的保留时间是不同的。你用过手性柱没有,可以分离异构体的。
你的这两个还差了一个甲基,有差异很正常。

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2楼2015-04-03 08:45:40
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寒露携阳

金虫 (小有名气)

送红花一朵
大神,我后来在样品中加入了一点标准品,结果在4‘-去甲基鬼臼毒素出峰时间上样品和标准品相同了,原来的那个不一样的峰不见了,这两种标准品出峰时间相差5min左右,应该是完全分离开了。两种标准品做了混标和单标,两种单标出峰时间与混标时间完全对应,说明标准品确实没问题。PS:在样品图中,在4‘-去甲基鬼臼毒素对应的出峰时间前几分钟有一个峰的光谱与标准品4‘-去甲基鬼臼毒素很像,是它提前出来了么?但是加了标样后还是在对应时间出的呀?洗脱条件如果需要调的话该怎么调呢?在对应的时间增加梯度么?
人生在世,有所不为,有所必为!
3楼2015-04-03 09:03:12
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寒露携阳

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by old_yang at 2015-04-03 08:45:40
你的这两种药物不是同一个物质,紫外吸收不可能完全重合,如果完全重合了,也很难说明它们就是一种物质,紫外毕竟只是一种分析手段而已。比较保留时间的差异,你的这两个物质在你的实验条件下是同时出峰了,但如果你 ...

大神,我后来在样品中加入了一点标准品,结果在4‘-去甲基鬼臼毒素出峰时间上样品和标准品相同了,原来的那个不一样的峰不见了,这两种标准品出峰时间相差5min左右,应该是完全分离开了。两种标准品做了混标和单标,两种单标出峰时间与混标时间完全对应,说明标准品确实没问题。PS:在样品图中,在4‘-去甲基鬼臼毒素对应的出峰时间前几分钟有一个峰的光谱与标准品4‘-去甲基鬼臼毒素很像,是它提前出来了么?但是加了标样后还是在对应时间出的呀?洗脱条件如果需要调的话该怎么调呢?在对应的时间增加梯度么?
人生在世,有所不为,有所必为!
4楼2015-04-03 09:03:38
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

有图吗
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
5楼2015-04-03 11:36:14
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寒露携阳

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-03 11:36:14
有图吗

问题已经解决了,是样品中的物质出现共峰了,改了改流动相浓度,谢谢您哈~
人生在世,有所不为,有所必为!
6楼2015-04-04 22:23:38
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