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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化问题，过一次镍柱，又过一次DEAE后依然有杂带，该如何进一步纯化？
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SKYLARK1991

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化问题，过一次镍柱，又过一次DEAE后依然有杂带，该如何进一步纯化？ 已有3人参与

目的蛋白大约60多KDa，pI=4.7，BL21中表达
过完His亲和层析后有两条杂带，再过一次DEAE弱阴离子交换，pH7.0 梯度洗脱
跑电泳显示目的条带下依然有杂带，求助该如何进一步纯化？
左一，过完镍柱样品
左二，过DEAE后样品



蛋白纯化问题，过一次镍柱，又过一次DEAE后依然有杂带，该如何进一步纯化？
IMG_20150319_134001_副本.jpg
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1楼 2015-03-21 10:33:21
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

再过离子交换或者分子筛

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2015-03-27 23:09:54
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果下面的条带是你蛋白降解的片段，那就不好办了

把His-tag换到另外一端？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2015-03-21 11:38:07
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SKYLARK1991

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-03-21 11:38:07
如果下面的条带是你蛋白降解的片段，那就不好办了

把His-tag换到另外一端？

降解的蛋白过DEAE不会被除掉么？
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-21 13:50:04
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SKYLARK1991 at 2015-03-21 13:50:04
降解的蛋白过DEAE不会被除掉么？...

不一定吧
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2015-03-21 14:44:43
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