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SKYLARK1991

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化问题,过一次镍柱,又过一次DEAE后依然有杂带,该如何进一步纯化? 已有3人参与

目的蛋白大约60多KDa,pI=4.7,BL21中表达
过完His亲和层析后有两条杂带,再过一次DEAE弱阴离子交换,pH7.0 梯度洗脱
跑电泳显示目的条带下依然有杂带,求助该如何进一步纯化?
左一,过完镍柱样品
左二,过DEAE后样品



蛋白纯化问题,过一次镍柱,又过一次DEAE后依然有杂带,该如何进一步纯化?
IMG_20150319_134001_副本.jpg
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by SKYLARK1991 at 2015-03-21 13:50:04
降解的蛋白过DEAE不会被除掉么?...

不一定吧
行至水穷处,坐看云起时
4楼2015-03-21 14:44:43
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查看全部 7 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果下面的条带是你蛋白降解的片段,那就不好办了

把His-tag换到另外一端?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2015-03-21 11:38:07
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SKYLARK1991

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2015-03-21 11:38:07
如果下面的条带是你蛋白降解的片段,那就不好办了

把His-tag换到另外一端?

降解的蛋白过DEAE不会被除掉么?
3楼2015-03-21 13:50:04
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

再过离子交换或者分子筛

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2015-03-27 23:09:54
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