24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小馒头来学习

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 533.4
帖子: 26
在线: 33小时
虫号: 3303866
注册: 2014-07-02
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 紧急求助：用凝血酶切GST时，但目标蛋白短时间内被降解，怎么回事？已有1人参与

本人利用gst标签纯化处一种蛋白，但过完亲和柱后在用凝血酶切标签时，短时间（1.5h）内目标蛋白（42KD左右）被降解，这期间gst标签也会被正常切下。跑变性电泳，只会得到标签（27KD）条带和标签下的一条带，但用凝胶色谱柱分离时，第一个峰对应的是下面的条带，第二个峰对应的才是GST标签，酶切条件是25摄氏度，80rmp。望各位大神给予帮助分析分析原因，初来报到，金币有限，在此献出全部家当寻求帮助，拜托拜托.......

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2015-03-18 21:25:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小馒头来学习

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 533.4
帖子: 26
在线: 33小时
虫号: 3303866
注册: 2014-07-02
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-03-19 02:18:12
你确定是降解了, 不是沉淀了？
有的蛋白溶解性不好，GST可以帮助溶解，但是一旦切掉GST，蛋白就会聚集沉淀
你把酶切混合物离心，然后直接用laemmli dye溶解底部的那一点，然后跑胶看看目标蛋白是不是在里面

您说的这个我先试试，，谢了哈....