应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 紧急求助：用凝血酶切GST时，但目标蛋白短时间内被降解，怎么回事？
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 1634  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小馒头来学习

新虫 (初入文坛)

[求助] 紧急求助：用凝血酶切GST时，但目标蛋白短时间内被降解，怎么回事？ 已有1人参与

本人利用gst标签纯化处一种蛋白，但过完亲和柱后在用凝血酶切标签时，短时间（1.5h）内目标蛋白（42KD左右）被降解，这期间gst标签也会被正常切下。跑变性电泳，只会得到标签（27KD）条带和标签下的一条带，但用凝胶色谱柱分离时，第一个峰对应的是下面的条带，第二个峰对应的才是GST标签，酶切条件是25摄氏度，80rmp。望各位大神给予帮助分析分析原因，初来报到，金币有限，在此献出全部家当寻求帮助，拜托拜托.......
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-18 21:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小馒头来学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-03-19 02:18:12
你确定是降解了, 不是沉淀了？
有的蛋白溶解性不好，GST可以帮助溶解，但是一旦切掉GST，蛋白就会聚集沉淀
你把酶切混合物离心，然后直接用laemmli dye溶解底部的那一点，然后跑胶看看目标蛋白是不是在里面

谢谢您的解答。但我不明白的是，这样说的话，那我接的凝胶柱出的第一个峰处的蛋白溶液应该是聚集后的目标蛋白，但做变形电泳也看不到目标条带，是怎么回事？
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-19 10:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定是降解了, 不是沉淀了？
有的蛋白溶解性不好，GST可以帮助溶解，但是一旦切掉GST，蛋白就会聚集沉淀
你把酶切混合物离心，然后直接用laemmli dye溶解底部的那一点，然后跑胶看看目标蛋白是不是在里面
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2015-03-19 02:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小馒头来学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-03-19 02:18:12
你确定是降解了, 不是沉淀了？
有的蛋白溶解性不好，GST可以帮助溶解，但是一旦切掉GST，蛋白就会聚集沉淀
你把酶切混合物离心，然后直接用laemmli dye溶解底部的那一点，然后跑胶看看目标蛋白是不是在里面

您说的这个我先试试，，谢了哈....
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-19 10:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +11 璃茉一定上岸 2026-04-10 11/550 2026-04-13 21:36 by gretl
[考研] 22专硕求调剂 +7 haoyun上岸 2026-04-11 9/450 2026-04-13 21:28 by gretl
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +33 xaw. 2026-04-11 34/1700 2026-04-13 21:23 by gretl
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +12 电气李 2026-04-13 13/650 2026-04-13 21:12 by gretl
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 吉大计算机技术331分，英语六级，求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 287求调剂 +15 Fnhc 2026-04-07 21/1050 2026-04-10 19:09 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +27 努力奋斗112 2026-04-07 30/1500 2026-04-10 15:06 by Kilig0317
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭