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sky995869588

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物叶片石蜡切片问题 已有3人参与

本人在做植物的石蜡切片时，发现做好的片子中叶片的的细胞尤其是栅栏组织发生收缩变形，好像还有一些破碎，表皮细胞好像染色不深，请问是哪个步骤出了问题。

步骤：FAA(70%乙醇：福尔马林：乙酸)固定液固定24h，经70%（1h），80%（1h），90%（1h），95%（1h），100%（30min），100%（30min）乙醇脱水；乙醇二甲苯混合液（20min），二甲苯纯溶液（20min），二甲苯纯溶液(20min)透明，浸蜡是机器完成的

请问：是不是以为固定液乙醇溶液高了，还是脱水时间长了，还是切片时对细胞造成了损伤？解决方法是什么？谢谢！

植物叶片石蜡切片问题
叶片1.jpg


植物叶片石蜡切片问题-1
叶片5.jpg
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1楼 2015-03-05 09:21:49
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sky995869588

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 艾小乐 at 2015-03-05 21:57:07
浸蜡也是关键的一步，我没有用过直接浸蜡的仪器，所以是不是浸蜡不完全也不好说。但有一点是可以肯定的，问题出在脱水和浸蜡，后边应该都没问题！
...

脱水时间也该减少吗？我看到文献中低浓度酒精脱水时间3—4小时，纯酒精1h,我感觉我脱水时间已经很短了啊？还应该减少梯度酒精脱水时间吗？
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5楼2015-03-05 22:06:26
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艾小乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
FAA一般是用50%的酒精配制，与剃度脱水的起始浓度一致为50％。起始梯浓度太大易导致叶片皱缩！

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-03-05 18:22:38
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sky995869588

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 艾小乐 at 2015-03-05 18:22:38
FAA一般是用50%的酒精配制，与剃度脱水的起始浓度一致为50％。起始梯浓度太大易导致叶片皱缩！

我看到大部分文献的FAA固定液都是70%的乙醇啊，幼嫩组织才用50%乙醇，只要将固定液浓度降低，起始浓度降到50%就行了吗？我那表皮细胞也是因为脱水过度造成那样的吗？
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3楼2015-03-05 20:57:11
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艾小乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
sky995869588: 金币+1, ★有帮助 2015-03-06 22:08:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by sky995869588 at 2015-03-05 20:57:11
我看到大部分文献的FAA固定液都是70%的乙醇啊，幼嫩组织才用50%乙醇，只要将固定液浓度降低，起始浓度降到50%就行了吗？我那表皮细胞也是因为脱水过度造成那样的吗？...

浸蜡也是关键的一步，我没有用过直接浸蜡的仪器，所以是不是浸蜡不完全也不好说。但有一点是可以肯定的，问题出在脱水和浸蜡，后边应该都没问题！

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4楼2015-03-05 21:57:07
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