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sky995869588

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物叶片石蜡切片问题已有3人参与

本人在做植物的石蜡切片时,发现做好的片子中叶片的的细胞尤其是栅栏组织发生收缩变形,好像还有一些破碎,表皮细胞好像染色不深,请问是哪个步骤出了问题。

步骤:FAA(70%乙醇:福尔马林:乙酸)固定液固定24h,经70%(1h),80%(1h),90%(1h),95%(1h),100%(30min),100%(30min)乙醇脱水;乙醇二甲苯混合液(20min),二甲苯纯溶液(20min),二甲苯纯溶液(20min)透明,浸蜡是机器完成的

请问:是不是以为固定液乙醇溶液高了,还是脱水时间长了,还是切片时对细胞造成了损伤?解决方法是什么?谢谢!

植物叶片石蜡切片问题
叶片1.jpg


植物叶片石蜡切片问题-1
叶片5.jpg
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艾小乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
FAA一般是用50%的酒精配制,与剃度脱水的起始浓度一致为50%。起始梯浓度太大易导致叶片皱缩!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-03-05 18:22:38
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sky995869588

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 艾小乐 at 2015-03-05 18:22:38
FAA一般是用50%的酒精配制,与剃度脱水的起始浓度一致为50%。起始梯浓度太大易导致叶片皱缩!

我看到大部分文献的FAA固定液都是70%的乙醇啊,幼嫩组织才用50%乙醇,只要将固定液浓度降低,起始浓度降到50%就行了吗?我那表皮细胞也是因为脱水过度造成那样的吗?
3楼2015-03-05 20:57:11
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艾小乐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


sky995869588: 金币+1, 有帮助 2015-03-06 22:08:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by sky995869588 at 2015-03-05 20:57:11
我看到大部分文献的FAA固定液都是70%的乙醇啊,幼嫩组织才用50%乙醇,只要将固定液浓度降低,起始浓度降到50%就行了吗?我那表皮细胞也是因为脱水过度造成那样的吗?...

浸蜡也是关键的一步,我没有用过直接浸蜡的仪器,所以是不是浸蜡不完全也不好说。但有一点是可以肯定的,问题出在脱水和浸蜡,后边应该都没问题!

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-03-05 21:57:07
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sky995869588

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 艾小乐 at 2015-03-05 21:57:07
浸蜡也是关键的一步,我没有用过直接浸蜡的仪器,所以是不是浸蜡不完全也不好说。但有一点是可以肯定的,问题出在脱水和浸蜡,后边应该都没问题!
...

脱水时间也该减少吗?我看到文献中低浓度酒精脱水时间3—4小时,纯酒精1h,我感觉我脱水时间已经很短了啊?还应该减少梯度酒精脱水时间吗?
5楼2015-03-05 22:06:26
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duan1987

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感觉像是脱水不彻底,我们一般做的小麦的幼穗和茎秆,纯酒精脱水三次,每次脱水2个小时以上,另外浸蜡的时候纯蜡至少两次以上!
相信爱的年纪,没能唱给你的歌曲,让我一生中常常追忆…
6楼2015-04-03 17:42:32
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Vincent2015

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by duan1987 at 2015-04-03 17:42:32
感觉像是脱水不彻底,我们一般做的小麦的幼穗和茎秆,纯酒精脱水三次,每次脱水2个小时以上,另外浸蜡的时候纯蜡至少两次以上!

脱水世间这么长,不会出现组织皱缩破碎吗?
7楼2015-04-11 11:17:54
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sunpeiguang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的叶子太硬了,要处理一下才行,后面的都不太重要
做自己想做的事情,哦也
8楼2015-06-12 17:05:40
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