24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
查看: 5488  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母双杂交AD载体构建已有4人参与

通过酵母双杂交筛选到互作蛋白,目前正在构建AD载体,其中photosystem I assembly protein Ycf4和TRAF transcription factor这两个基因,克隆测序后,酶切后与pGADT7连接,跑胶检测存在目的条带(连接应该没有问题),连接产物10ul转化全式金公司大肠杆菌感受态,冰浴40min;42°,60S;冰浴2.5min,SOC恢复培养1h,100ul涂氨苄抗性平板,过夜培养约14h,有克隆长出,而且存在大量类似于未涂均匀的菌落,菌液PCR检测无阳性克隆。重复几次怀疑是感受态有问题,又做了转化puc19和pGADT7的阳性对照,菌落生长情况与前面情况相同,请见图。目前怀疑抗生素有问题,烦请各位高手帮忙分析下可能存在的原因,感激,

酵母双杂交AD载体构建
control.jpg


酵母双杂交AD载体构建-1
pGADT7.jpg


酵母双杂交AD载体构建-2
YCF4.jpg


酵母双杂交AD载体构建-3
TRAF.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang1991320

铜虫 (初入文坛)

我以前有过类似的情况,当时检查出来是新买的AMP的问题
10楼2015-08-24 10:52:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

WSM1993

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
faile18: 金币+2, 有帮助 2015-02-28 12:19:20
应该就是抗生素的问题,也许你可以试一下双抗

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-02-28 11:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

faile18

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by WSM1993 at 2015-02-28 11:37:07
应该就是抗生素的问题,也许你可以试一下双抗

双抗?pGADT7只有氨苄抗性,双抗您指的是?
3楼2015-02-28 12:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
faile18: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-03-01 09:56:42
培养皿无 抗性,这是肯定的了。。。。。。。。。。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-02-28 13:08:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见