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酵母双杂交AD载体构建已有4人参与
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通过酵母双杂交筛选到互作蛋白，目前正在构建AD载体，其中photosystem I assembly protein Ycf4和TRAF transcription factor这两个基因，克隆测序后，酶切后与pGADT7连接，跑胶检测存在目的条带（连接应该没有问题），连接产物10ul转化全式金公司大肠杆菌感受态，冰浴40min；42°，60S；冰浴2.5min，SOC恢复培养1h，100ul涂氨苄抗性平板，过夜培养约14h，有克隆长出，而且存在大量类似于未涂均匀的菌落，菌液PCR检测无阳性克隆。重复几次怀疑是感受态有问题，又做了转化puc19和pGADT7的阳性对照，菌落生长情况与前面情况相同，请见图。目前怀疑抗生素有问题，烦请各位高手帮忙分析下可能存在的原因，感激， 。 control.jpg  pGADT7.jpg  YCF4.jpg  TRAF.jpg |
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2楼2015-02-28 11:37:07