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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达时有时无
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18310137195

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白表达时有时无已有4人参与

我最近做了一个蛋白酶，相同的条件下，今天有表达，明天就没有，真不知道是怎么回事
望各位给分析下可能导致这样的因素都有什么
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1楼2015-02-26 17:20:41
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w26150665w

铜虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-27 21:38:01
1. 菌株是不是接错了
2. 是不是诱导表达条件错了，包括温度、诱导时间
3. 细节上有没疏漏
4. key：当日不适合做实验~~~
5. 低概率 表达质粒丢失
6. 表达过程无法判断是否表达 定性需用SDS-PAGE
7. 其他。。。。
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多多交流学习
2楼2015-02-27 09:17:32
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是在大肠杆菌中做的表达吗？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-02-27 17:19:37
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18310137195

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-02-27 17:19:37
是在大肠杆菌中做的表达吗？

是的   诱导温度  时间都一样的
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4楼2015-02-27 19:52:29
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18310137195

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by w26150665w at 2015-02-27 09:17:32
1. 菌株是不是接错了
2. 是不是诱导表达条件错了，包括温度、诱导时间
3. 细节上有没疏漏
4. key：当日不适合做实验~~~
5. 低概率 表达质粒丢失
6. 表达过程无法判断是否表达 定性需用SDS-PAGE
7. 其他。。。 ...

你好   菌株没接错，诱导温度、时间都没变，表达质粒也没丢失，因为包涵体有表达，我需要的是上清里的活性表达，所以我现在很郁闷，因为我最近天天在做，时有时无的
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5楼2015-02-27 19:55:22
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
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4楼: Originally posted by 18310137195 at 2015-02-27 19:52:29
是的   诱导温度  时间都一样的...

意思是你做出来了，但是是在包涵体中，你想要的是在上清中有表达，如果你第一次在上清中没有表达的话，以后就很难出现了，说明蛋白应该是挺难做的或者对环境太敏感了吧。呵呵，实在做不出来可以找个公司做嘛，百度上一搜蛋白表达，排在一两位的公司都可以打电话问问情况嘛，不用自己纠结啦
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-02-28 09:00:37
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w26150665w

铜虫 (正式写手)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 18310137195 at 2015-02-27 19:55:22
你好   菌株没接错，诱导温度、时间都没变，表达质粒也没丢失，因为包涵体有表达，我需要的是上清里的活性表达，所以我现在很郁闷，因为我最近天天在做，时有时无的...

排除了 那就剩下 诱导剂浓度了
包涵体表达就是有蛋白表达
你要的是上清表达，就必须优化表达条件

还有一个可能 时有时无 可能出现在你跑SDS-PAGE的时候细节有没问题
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多多交流学习
7楼2015-02-28 09:09:26
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九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
每次的蛋白表达量很少么?上清活性蛋白表达本来就挺困难的，多半是因为表达条件的问题。。。完全可以找一个做蛋白的公司，让他们来做，最后找他们要份技术报告就可以了，比如这家公司：http://www.detaibio.com/bacteria ... rantee-service.html
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8楼2015-02-28 09:20:09
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781055707

木虫 (著名写手)
★
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质粒不稳定，质粒丢失。。。。。。
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2015-02-28 09:56:17
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18310137195

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-02-28 09:00:37
意思是你做出来了，但是是在包涵体中，你想要的是在上清中有表达，如果你第一次在上清中没有表达的话，以后就很难出现了，说明蛋白应该是挺难做的或者对环境太敏感了吧。呵呵，实在做不出来可以找个公司做嘛，百度 ...

因为之前我调节了一下条件，包涵体中是一直都有表达的，但是在上清中就时有时无，要是能直接找公司做，真就省心多了，老板要让我们自己做的
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10楼2015-03-03 13:35:24
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