应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 紧急求助：酵母中GFP问题
41/1返回列表
查看: 1482  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

绿草如茵

木虫 (小有名气)

[求助] 紧急求助：酵母中GFP问题

大家好，本人想做一个蛋白在酵母中的定位情况，GFP在N端与目的基因融合，在酵母中表达后，利用荧光显微镜观察（融合基因证实转进去了），就是看不见应该，请问是怎么回事？而对照（仅GFP连接表达载体的）有荧光，请大家帮忙分析师怎么回事？不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
1楼 2013-04-08 22:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-09 07:48:50
1 楼主检查一下构建载体时有没犯低级错误，如终止子该不该有的问题
2 我没搞过酵母荧光，但从做植物经验看，GFP在N端还是C端有时候影响结果，楼主试试构建一个C端的3
3 有些荧光标记蛋白在酵母中用激光共聚焦也看不出来，上次Zeiss的一个工程师来安装新机器，他介绍老式的LSM510看不了一些酵母的荧光结果，而他们的新LSM780就可以，楼主可以考虑换用更强大的机器。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-04-09 00:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

绿草如茵

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-04-09 00:13:14
1 楼主检查一下构建载体时有没犯低级错误，如终止子该不该有的问题
2 我没搞过酵母荧光，但从做植物经验看，GFP在N端还是C端有时候影响结果，楼主试试构建一个C端的3
3 有些荧光标记蛋白在酵母中用激光共聚焦也看 ...

谢谢你的回答！1.我在N端融合GFP是 没有加终止密码子的。
                     2。现在的问题是对照eGFP+载体有荧光，融合了我目的基因的都没有荧光！
                      3。我的对照也是在同一个酵母宿主的，对照荧光很亮，我们的ZEISS是710，看对照或者别的表达体系里的荧光就很好，所以仪器应该没有问题！
     所以郁闷。。。。。。。不知道是怎么回事？同样在N端，在洋葱表皮里面就表达得很好！。。。。。。郁闷 啊！
赞一下 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索！
3楼2013-04-09 08:47:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 绿草如茵 at 2013-04-09 08:47:51
谢谢你的回答！1.我在N端融合GFP是 没有加终止密码子的。
                     2。现在的问题是对照eGFP+载体有荧光，融合了我目的基因的都没有荧光！
                      3。我的对照也是在同一个酵母宿主的 ...

洋葱和酵母成像效果差很多，没有多少可比性，照你的描述有可能就是你的目的集团有影响，有没试过连RFPYFP之类的
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-04-09 18:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 绿草如茵 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭